冷冻干燥法制备1型糖尿病噬菌体展示疫苗

摘要

目前，疫苗保存常常采用冷冻干燥技术（Freeze-Drying）。冷冻干燥，也称冻干。与液体剂型相比，冻干剂型能在环境温度长期保持稳定，因此，此技术被广泛应用于生物制品领域。冻干后的样品具有热稳定性高，活性物质不易氧化，运输不依赖于冷链、保存期长、不易污染等优点。然而，我们仍面临如下问题：①近年来，随着冻干技术的成熟，冻干人血清白蛋白（HSA）、角膜、酵母菌、乳酸菌培养基等技术已日臻成熟。迄今国内应用冻干技术制备的疫苗多为减毒活疫苗、活菌菌苗、干扰素、转移因子等。然而，冻干噬菌体展示疫苗尚未见报道。②在最短冻干周期内制备出高质量的样品，冻干过程至关重要。这有赖于简化的冻干曲线。升华干燥温度高，可以大大缩短冻干周期。但有学者认为，升华温度如果高于共晶点温度（Te），会导致物料的融化崩解、疫苗冻干失败、滴度明显下降。③牛血清白蛋白（BSA）是一种蛋白类的保护剂，它广泛地应用于冻干保护剂中。但是其潜在的血源性污染及它本身的抗原致敏问题，限制了它作为保护剂的应用。
　　 为解决以上问题，我们此研究主要目的：①冷冻干燥法制备1型糖尿病噬菌体展示疫苗；②筛选1型糖尿病噬菌体展示疫苗保护剂，评价不含蛋白成分保护剂的保护效果；③简化冻干曲线，高于共晶点温度升华，缩短冻干周期。
　　 经正交试验筛选，最佳保护剂配方为：海藻糖10.85％+甘氨酸17.37％（w/v）。最佳冻干曲线为：预冻温度：-40℃预冻时间：4 hours降温速度：1.5℃/minute；升华温度：-15℃升华时间：5 hours升华速度：1.5℃/minute；解析温度：25℃解析时间：4 hours解析速度：1.5℃/minute；真空度：0.02mbar。
　　 本研究制备的1型糖尿病噬菌体展示疫苗冻干剂型，冻干前后疫苗滴度下降不超过0.5log值。筛选的保护剂，不含蛋白成分，保护效果良好。高于共晶点温度升华，无融化崩解，其冻干周期明显缩短，但其简化冻干曲线后疫苗滴度并未显著下降，与未经简化组相比，无显著性差异（P>0.05）。且冻干后样品含水量<3％。25℃室温6个月疫苗滴度下降不大，显著低于未冻干的液体剂型疫苗。

目录

文摘

英文文摘

一、前 言

（一）、冷冻干燥设备、基本原理

（二）、常用冻干保护剂种类和特性

（三）、噬菌体展示技术

（四）、冻干曲线

二、实验材料和方法

（一）、实验材料

（二）、主要试剂及培养基配制

（三）、基本实验操作

（四）、实验方法

三、结果和分析

（一）、1型糖尿病疫苗冷冻干燥工艺的试验最佳条件的确立

（二）、样品共晶点

（三）、简化冻干曲线对疫苗滴度的影响

（四）、冻干样品外观形态

（五）、冻干样品电镜观察

（六）、冻干样品热稳定性结果

（七）、含水量测定结果

四、讨论

五、小结

参考文献

论文综述

参考文献

附 录

致 谢

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