临床常见致病念珠菌的快速鉴定和近平滑念珠菌形态转换观察

摘要

第一章常见深部念珠菌快速鉴定方法的建立
　　 第一节常见深部念珠菌PCR-RFLP方法的建立
　　 目的建立常见深部念珠菌的PCR-RFLP方法。方法对6种念珠菌标准株（包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌），使用引物PR1-PR3扩增ITS1-ITS2区。按照rDNA-ITS-RFLP方法采用不同酶进行酶切，比较酶切带型图，选择最佳的酶切方案，鉴别常见6种念珠菌。结果应用MSPI或者HhaⅠ+HaeⅢ进行酶切反应，6种念珠菌标准株的酶切带型有明显差异，易于鉴别。结论使用MSPI或者HhaⅠ+HaeⅢ进行酶切，可以通过一次反应，鉴别出常见的6种致病念珠菌，为临床念珠菌的快速准确诊断赢得时间。
　　 第二节常见深部念珠菌多重PCR快速鉴定方法的建立
　　 目的为了快速准确鉴定深部感染常见的6种念珠菌，建立一种多重PCR技术。方法对6种念珠菌包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌标准株，通过2条通用引物和6条种特异性引物扩增ITS1-ITS2区DNA序列，初步建立6种念珠菌的多重PCR检测方法。并与CHROMagar快速显色法结果进行比较。结果CHROMagar快速显色法可用于念珠菌初步分离和鉴定，只能对白念珠菌、热带念珠菌和克柔念珠菌进行较好鉴别。而多重PCR反应可以将每种念珠菌扩增出通用和特异性两个条带，易于区别。结论多重PCR方法可一次鉴定出常见的6种致病念珠菌，与传统CHROMagar快速显色法相比，快速准确，具有一定的实用性。
　　 第二章念珠菌临床致病株鉴定及临床分析
　　 第一节念珠菌临床致病株多重PCR鉴定
　　 目的使用多重PCR方法鉴定临床念珠菌病标本。方法收集2009年度念珠菌临床株共50株。分别应用传统CHROMagar快速显色法和多重PCR方法对这些念珠菌临床致病株进行鉴定。以ITS区测序鉴定作为金标准，比较这两种念珠菌鉴定方法。结果CHRO Magar快速显色法判断准确37株，准确率74％；多重PCR能快速准确鉴定临床最常见的6种致病念珠菌（白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌），判断准确46株，准确率92％，且未判出的4株菌不在本诊断体系之中。结论多重PCR方法的确能快速准确鉴定临床最常见的6种致病念珠菌，总体而言优于传统的CHROMagar诊断方法。
　　 第二节临床致病念珠菌感染分析
　　 目的通过对真菌检验室收集念珠菌临床致病株的鉴定，分析不同念珠菌种临床致病株分布和发病特点。方法收集中国医学科学院皮肤病研究所真菌检验室2009年度念珠菌临床标本，分别应用传统方法和分子方法进行鉴定。结合患者性别、年龄、患病部位等一般资料，初步分析不同念珠菌种临床致病株的分布和发病特点。结果收集到临床致病念珠菌50株，其中白念珠菌28株（56％），非白念珠菌中，近平滑念珠菌的比例最高（18％）。另外还发现一些少见念珠菌临床致病的情况，如涎沫念珠菌、耶罗维亚解脂酵母、希木龙念珠菌。结论白念珠菌仍然是最常见的致病念珠菌，但非白念珠菌中近平滑念珠菌的感染比例也较高。念珠菌种的鉴定对指导临床治疗具有很大意义。
　　 第三章近平滑念珠菌的WO形态转换观察
　　 目的观察近平滑念珠菌在不同培养基的形态转换现象，以及温度对其形态转换的影响。方法收集近平滑念珠菌正常人皮肤携带株及临床致病株和标准株，接种于改良Lee培养基和含桃红B的YPD培养基，观察其不同形态转换，以及温度变化对光滑（W）与皱褶（O）形态转换的影响。结果近平滑念珠菌在Lee培养基和含桃红B的YPD培养基上，均可以出现多种形态以及一定频率W-O转换现象。在观察W向O形态转换过程中发现，与25℃培养温度相比，37℃条件下光滑菌落形态占更多的比例。结论近平滑念珠菌体外培养时存在形态转换及W-O转换现象，且于37℃时更易保持光滑形态。含桃红B的YPD培养基也可以用于基本的W-O形态转换观察。

目录

文摘

英文文摘

致语

缩略语

前言

参考文献

第一章 常见深部念珠菌快速鉴定方法的建立

第一节 常见深部念珠菌PCR-RFLP方法的建立

参考文献

第二节 常见深部念珠菌多重PCR快速鉴定方法的建立

参考文献

第二章 念珠菌临床致病株鉴定及临床分析

第一节 念珠菌临床致病株多重PCR鉴定

参考文献

第二节 临床致病念珠菌感染分析

参考文献

第三章 近平滑念珠菌的WO形态转换观察

参考文献

全文小结

综述1 深部念珠菌感染的诊断进展

参考文献

综述2 肺孢子菌肺炎的诊治进展

参考文献

在读期间发表文章及参加学术会议和培训和会议收录摘要

致 谢