阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者胆固醇外流功能的改变及机制研究

摘要

背景
　　 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnoea hypopneasyndrome，OSAHS）作为严重影响人类健康的常见疾病，目前被认为是心血管疾病的独立危险因素。研究也发现，心血管疾病可能发生在OSAHS的早期，甚至在没有经典的心血管疾病危险因素的OSAHS患者中发生动脉粥样硬化，早发的动脉粥样硬化是OSAHS患者心血管疾病发病率和病死率升高的原因之一。动脉粥样硬化形成的早期标志是巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞，并在动脉壁沉积。高密度脂蛋白（HDL）及其介导的胆固醇逆向转运（RCT）是机体抗动脉粥样硬化的重要机制之一，巨噬细胞胆固醇外流是胆固醇逆转运过程中的重要的初始步一骤，而三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ATP binding cassette transporter A1，ABCAl）、三磷酸腺苷结合盒转运体G1（ATP binding cassette transporter G1，ABCGl）和清道夫受体B1（scavenger receptor class B1，SR-BI）都是重要的介导巨噬细胞内胆固醇流出的细胞表面蛋白。目前已知在炎症、脂质紊乱以及糖代谢异常等疾病过程中，这一过程障碍导致的保护功能丧失是发生动脉粥样硬化的重要原因。睡眠呼吸暂停在动脉粥样硬化形成中所起的重要的作用已得到人们重视，也有研究已经证实在体外OSAHS患者的HDL-C功能存在异常，但其具体机理仍不清楚。
　　 目的
　　 1.通过对OSAHS患者外周血单核巨噬细胞胆固醇外流功能及其相关受体的研究，探讨OSAHS患者早发动脉粥样硬化的相关机制。
　　 2.建立OSAHS鼠模型，并在OSAHS鼠动脉内膜及腹腔巨噬细胞中，观察间断低血氧对于胆固醇外流及其相关受体以及对动脉粥样硬化形成的影响。
　　 方法
　　 1.收集北京协和医院经多导睡眠图（polysomnography，PSG）确诊的OSAHS患者和年龄及性别匹配的健康对照，根据AHI（呼吸紊乱指数，apnea hyponea index，AHI）将其分为三组：对照组，轻中度OSAHS组，重度OSAHS组，所有受试者均抽取外周静脉血30ml，进行血脂、血糖、hsCRP等生化指标的检测。
　　 2.采用密度梯度离心和粘附法分离、纯化人外周血单核细胞，体外培养并巨噬化后，在mRNA水平，用RT PCR方法研究人单核巨噬细胞上ABCAl、ABCGl和SR-BI的表达水平；在蛋白水平，用Western Blot方法检测人单核巨噬细胞上的ABCAl的蛋白表达。
　　 3.使人外周血单核巨噬细胞负载3H放射性同位素标记的胆固醇，分别用空白对照、自身血清、HDL及APOAl诱导细胞内胆固醇外流，测定胆固醇外流率。
　　 4.成功建立OSAHS鼠动物模型，并于间断低氧处理18周时处死实验动物，分离鼠主动脉，观察其动脉内皮动脉粥样硬化病变情况。
　　 5.收集鼠腹腔巨噬细胞分别研究对照组和间断低氧组两组鼠腹腔巨噬细胞ABCAl、ABCGl和SR-BI的mRNA表达水平及蛋白表达情况，并应用3H放射性同位素法测定鼠巨噬细胞胆固醇外流率。
　　 6.统计方法：采用SPSS13.0软件进行统计分析，计量资料以X±SD表示，组间比较以one-way ANOVA进行分析，线性相关应用Pearson’s相关分析，回归分析采用多重线性回归分析方法。
　　 结果：
　　 1.在对照组、轻中度OSAHS组和重度OSAHS组三组之间，AHI（2.14±1.28，18.77±8.50 vs62.9±20.7）、Hs-CRP（0.366±0.19，1.02±0.68 vs4.95±3.45）、平均血氧饱和度（96.6±1.34，95±1.73 vs93.5±1.22）和最低血氧饱和度（92.4±1.82，87±6.24 vs76.1±4.92）均存在显著性差异（P均<0.05），其余所有指标包括年龄、性别、BMI、腰围、血压、血糖及各种血脂指标的水平等在三组间均无统计学差异。
　　 2.RT PCR检测结果发现与对照组（0.534±0.012）相比，轻中度（0.394±0.037）和重度OSAHS组患者（0.344±0.039）单核巨噬细胞表面ABCAl mRNA的表达显著降低（P均<0.05），其降低程度与OSAHS严重程度一致。轻中度OSAHS患者（0.37334±0.02）与重度OSAHS患者（0.3544±0.03）和对照组（0.48084±0.02）相比，ABCGl的表达是也明显降低的（P<0.05），但是在轻中度OSAHS组和重度OSAHS组之间没有观察到显著性差别（P=0.21）。对照组、轻中度OSAHS组和重度OSAHS组SR-BI mRNA的表达（0.35814±0.03，0.364±0.02，0.394±0.05）在各组间无显著差别（p均>0.05）。
　　 3.Western Blot检测结果发现，随着睡眠呼吸障碍的程度加重，ABCAl的蛋白表达水平明显下降。
　　 4.在正常对照组患者、轻中度OSAHS组和重度OSAHS组患者中，ApoAl诱导人外周血单核细胞来源的巨噬细胞的胆固醇外流率分别为：13.3％±3.9％，6.6％±2.1％，3.3％±1.6％（患者与对照组相比P均<0.01）；HDL诱导的胆固醇外流率分别为：10.5％±12.5％，9.4％±10.2％，6.9％±7.2％，有下降趋势（P分别为0.59、0.34和0.32）；自身血清诱导的胆固醇外流水平分别为：17.5％±5.4％，9.4％±3.2％，5.5％±1.9％，三组之间均存在统计学差异（P<0.01）。
　　 5.多重线性回归分析及Pearson’s相关分析均显示：ABCAl的表达水平与AHI之间存在负相关（r=-0.831，p<0.001），血清介导的胆固醇外流率和ApoAl介导的胆固醇外流率与AHI之间也都存在负相关（分别为r=-0.917，r=-0.880，P<0.001），提示随着AHI的升高，ABCAl的表达水平、ApoAl介导的通过ABCAl作用的胆固醇外流率及血清介导的胆固醇外流率都是降低的。
　　 6.间断低氧处理至18周时，金黄地鼠主动脉内皮均未见明显粥样斑块或脂质条纹形成。
　　 7.18周时间断低氧的金黄地鼠巨噬细胞表面ABCAl、ABCGl和SRBI三种受体的mRNA的表达与对照组相比，均有不同程度的增加。分别为0.46±0.03 vs0.36±0.02，0.60454±0.12 vs0.41±0.03，0.63±0.15 VS0.3486±0.04（P均<0.05）。
　　 8.Western Blot结果提示，在间断低氧组金黄地鼠的腹腔巨噬细胞上，ABCAl、ABCGl的蛋白表达都是增高的。
　　 9.在对照组和OSAHS组金黄地鼠中，ApoAl、HDL和自身血清诱导腹腔巨噬细胞的胆固醇外流率分别为：38.5％±8.5％vs45.8％±9.0％（P=0.833），52.9％±2.8％VS70.5％±4.5％（P=0.1），40.7％±12.1％vs65.5％±4.4％（P=0.197），间断低氧组的胆固醇外流率比对照组均有增高趋势，但都没有统计学差异。
　　 结论
　　 1.在OSAHS患者中，单核巨噬细胞ABCAl的基因及蛋白表达显著下降，并且随着睡眠呼吸暂停的程度加重，其下降趋势越来越明显。
　　 2.OSAHS患者巨噬细胞胆固醇外流能力明显受损，以ABCAl通路介导的胆固醇外流下降为主。
　　 3.ABCAl、ABCGl的mRNA表达及血清和APOA1介导的胆固醇外流能力均与AHI呈显著负相关，AHI是影响OSAHS患者胆固醇外流功能的重要因素之一。
　　 4.相对短期的间断低氧引起金黄地鼠腹腔巨噬细胞ABCAl、ABCGl和SR-BI的表达上调。

目录

文摘

英文文摘

缩写词表

前 言

实验材料

第一部分 睡眠呼吸暂停低通气综合征患者外周血单核巨噬细胞ABCA1表达及其介导的胆固醇外流功能的研究

实验方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

第二部分 睡眠呼吸暂停低通气综合征鼠动物模型的建立及其腹腔巨噬细胞ABCA1表达及其介导的胆固醇外流功能研究

实验方法

实验结果

讨 论

结 论

参考文献

综述

参考文献

致 谢

个人简历