肠道病毒感染在儿童手足口病及下呼吸道感染疾病中的研究

摘要

目的：分析肠道病毒（EV）在儿童手足口病及下呼吸道感染疾病中的感染状况及血清型特征，并探讨实时PCR方法在临床标本中的诊断价值，为临床诊断和治疗提供参考。
　　 方法：1.研究对象2009年4月至9月，首都儿科研究所附属儿童医院感染科门诊诊断的手足口病患儿。采集患儿咽拭子和疱疹液及血清，用实时RT-PCR方法同时检测肠道病毒通用型（EV）、柯萨奇A16型（CA16）、肠道病毒71型（EV71）；用ELISA方法对留取的双份血清标本同时检测柯萨奇A16型、肠道病毒71型IgM抗体，结果与实时RT-PCR法结果进行比较分析。选取CA16、EV71阳性标本进行VP1区基因片段扩增，电泳鉴定后测序，与Genbank进行blast比对，并利用生物分析软件进行进化分析。
　　 2.研究对象2008年6月至2009年9月，首都儿科研究所附属儿童医院呼吸病房收治的下呼吸道感染患儿。采集患儿静脉血分离血清，呼吸道标本，ELISA方法检测血清EV IgM，实时RT-PCR方法检测呼吸道标本。与其他下呼吸道感染相关的病原进行比较分析。对RT-PCR阳性标本进行VP4区扩增测序，部分标本进行5'非编码区的扩增测序，结果与Genbank进行blast比对，确定EV血清型。
　　 结果：1.174例手足口病患儿中EV阳性167例，CA16阳性率67.1％（112/167），EV71阳性率27.5％（46/167）。CA16：EV71为2.43:1。131例患儿采集到双份静脉血，第一次血清CA16型IgM抗体阳性38.9％（51/131），二次血清阳性74.8％（98/131）；第一次血清EV71型IgM抗体阳性19.1％（25/131），二次血清阳性24.4％（32/131）。第一次血清结果与实时RT-PCR结果进行比对，CA16、EV71一致性检验Kappa值0.353、0.735；二次血清结果与实时RT-PCR结果比对，CA16、EV71一致性检验Kappa值0.830、0.898。实时RT-PCR法结果与二次血清检测IgM结果一致性很好。测序结果：CA16阳性标本病毒株同源性88.7％-98.5％，与13株B基因组参比序列核苷酸同源性88.1％-96.4％。EV71标本病毒株核苷酸同源性95.8％-98％，属C4亚型；与C4亚型参比序列核苷酸同源性96.5％-98.2％；与C4亚型以外的其他基因型及亚型的同源性81.9％-90％。
　　 2.402例下呼吸道感染患儿，血清EV-IgM抗体阳性21.1％（85/402），柯萨奇病毒74例，埃可病毒56例，其中45例患儿血清同时检测到上述两种病毒IgM抗体。2008年6月～2009年9月的15个月均检测到EV-IgM抗体，2008年12月阳性率最低，2008年7月阳性率最高。学龄儿童阳性率相对较高。85例EV阳性患儿中62例伴MP感染，10例伴常见呼吸道病毒感染。呼吸道标本实时RT-PCR法检出EV阳性15例，阳性率3.7％（15/402）。阳性标本测序结果通过blast比对，确定EV血清型包括EV683例，ECH0303例，CVB22例，EV71、CVA3、CVA9、CVB1和CVB3各1例。与肺炎相关血清型有EV71、CVA3、CVA9、ECH030、EV68、CVB1；与支气管炎相关血清型ECH030、CVB2、CVB3。
　　 结论1.2009年夏季儿童手足口病病原以CA16和EV71为主。EV71阳性率较之前报道有所上升，以C4亚型为主。对于手足口病，实时RT-PCR法较血清学检测特异性IgM抗体更适于疾病早期诊断。2.下呼吸道感染患儿血清EV-IgM抗体全年均可检测到，近年与下呼吸道感染相关的EV有柯萨奇病毒、EV68、EV71和ECH030等血清型。对于下呼吸道感染的EV诊断应综合考虑。

目录

文摘

英文文摘

缩略词

前言

第一部分：肠道病毒感染在儿童手足口病中的研究

引言

实验对象

研究方法

实验结果

讨论

小 结

第二部分：肠道病毒感染在儿童下呼吸道感染疾病中的研究

引言

研究对象

实验方法

实验结果

讨论

小结

参考文献

论文综述

参考文献

附 录

致 谢