Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞——干细胞基因及耐药基因研究

摘要

目的：初步探讨脑胶质瘤细胞对烷化剂类抗肿瘤药物耐药产生的机理，在诱导产生耐药细胞的基础上，探讨在耐药形成的过程中，干细胞基因与耐药基因表达的变化，并尝试找到两者之间的关系，从而为个体化治疗提供依据。
　　 方法：星形细胞瘤细胞由北京大学医学部惠赠，使用含有100ug/ml尼莫司汀（ACNU）的培养基持续培养5代，撤药后得到耐药细胞，通过CCK-8法比较药物诱导前后肿瘤细胞对尼莫司汀耐受性的差异；使用CD133抗体标记，流式细胞仪分析诱导前后CD133阳性细胞数量的变化；用实时荧光定量PCR的方法检测干细胞基因OCT4、Sox2、Nestin，耐药基因MGMT、MDR1以及p53基因表达量的变化；采用甲基化特异性高分辨率热溶解法（MS-HRM）检测MGMT基因启动子区域甲基化水平变化。
　　 结果：在诱导之后，星形细胞瘤细胞在尼莫司汀中增殖活力强于对照，半数抑制浓度明显提高，对药物ACNU的耐受性增强；诱导前后的星形细胞瘤细胞中CD133阳性细胞比例分别为9.74％和0.49％，CD133阳性细胞数量明显减少；经过药物诱导后，Sox2、Nestin基因表达下调，OCT4基因的表达下调1.84倍，具有显著差异；MGMT基因表达上调56.6倍，具有极显著差异，MDR1基因表达量没有变化；两组细胞中，MGMT基因启动子甲基化水平均无明显变化。
　　 结论：通过大剂量烷化剂药物ACNU短期诱导的方法可以获得耐药细胞；该方法得到的耐药细胞中，干细胞基因的表达下降，耐药基因MGMT的表达明显升高；MGMT基因启动子甲基化水平与其表达水平之间并不平行。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

前言

一、细胞的培养和诱导

材料与方法

结果

小 结

二、耐药细胞CD133阳性细胞比例鉴定

材料和方法

结果

小结

三、mRNA水平基因表达量检测

材料和方法

结果

小结

四、MGMT基因启动子甲基化测定

材料和方法

结果

小 结

讨论

结论

参考文献

综述 脑胶质瘤耐药机制中MGMT的作用

参考文献

致谢