抗VEGF药物贝伐单抗对视网膜安全性的实验研究

摘要

[背景]目前抗血管内皮生长因子（VEGF）药物在治疗眼部新生血管疾病中的应用具有广泛前景，而VEGF被证实对神经细胞具有保护营养作用，因此玻璃体腔注射抗VEGF药物对神经视网膜是否有潜在的不良作用有待进一步验证。其中贝伐单抗（Bevacizumab）是近年出现的新型血管生成靶向治疗药物，该药在眼科疾病中的临床应用尚未被认证，目前贝伐单抗眼科用药的安全性研究相对缺乏。
　　 [目的]评估贝伐单抗对成年哺乳动物视网膜神经感觉层培养组织的不良反应，进一步明确该药用于眼科疾病的安全性。
　　 [方法]采用体外培养新鲜猪眼球视乳头附近视网膜-脉络膜-巩膜复合组织的方法，在培养液中给予不同浓度贝伐单抗（不加药组为对照组A，实验组B、C、D浓度分别为0.125 mg/ml，0.25 mg/ml，1.25mg/m1），培养12h、24h、48h后，使用光镜、TUNEL、GFAP抗体免疫荧光、电镜等方法观察各组神经视网膜的组织形态、细胞凋亡、超微结构等改变。
　　 [结果]光镜下观察，对照组与0.125mg/ml组视网膜各层组织形态学表现均无异常；0.25mg/ml组和1.25mg/ml组视网膜观察到神经节细胞肿胀、减少，内核层变薄，感光细胞层结构松散等表现。TUNEL检测凋亡显示，0.125mg/ml组各时间点的视网膜各层细胞凋亡率较对照组未见明显升高（P>0.05）；0.25mg/ml（24h、48h）组和1.25mg/ml（12h、24h）组视网膜神经节细胞层凋亡率明显升高（P<0.05），其它核层未见明显升高。GFAP抗体免疫荧光显示，0.25mg/ml（48h）组，1.25mg（24h、48h）组在内丛状层可见Müller细胞GFAP抗体信号，其余各浓度各时间点的GFAP抗体荧光信号在分布、强度上与对照组无明显差异。电镜下观察，0.125mg/ml组与对照组无明显差异，0.25mg/ml组，1.25mg/ml组比较对照组可见神经节细胞粗面内质网明显扩张，感光细胞内节线粒体肿胀，线粒体嵴明显减少甚至缺失。
　　 [结论]培养的猪眼视网膜在贝伐单抗为0.125mg/ml时，在组织形态学、超微结构、凋亡检测、免疫荧光等方面均未见明显异常，但经0.25mg/ml、1.25mgml的贝伐单抗培养后，神经节细胞、感光细胞出现了一些损伤性改变，提示低浓度的贝伐单抗对于视网膜是安全的，高浓度的贝伐单抗可能会造成神经视网膜损伤。在临床应用贝伐单抗时应当对其剂量、频度加以适当控制。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

前言

材料与方法

一 实验对象

二 主要试剂

三 抗体

四 主要耗材

五 主要仪器

六 主要工作液的制备

七 实验方法

结 果

一 检验视杯的生物活性

二 光学显微镜观察视网膜组织形态学变化

三 TUNEL法观察神经视网膜细胞凋亡

四 GFAP抗体免疫荧光染色

五 电镜观察视网膜各层细胞超微结构变化

讨论

一、本研究的必要性

二、本研究设计思路

三、实验结果的分析

四、本研究的局限性

五、本研究的创新性

六、展望

结 论

参考文献

综述

参考文献

致谢