不同产地槲蕨的质量对比研究

摘要

槲蕨[Drynaria roosii Nakaike(异名:D.fortunei J.Sm)]为槲蕨科槲蕨属多年生蕨类植物,其根茎入药为骨碎补,具有补肾强骨,疗伤止痛的功效。目前,在市场上,骨碎补药材的混用现象十分严重,文献记载目前作为骨碎补药用的植物共涉及到6属,15种植物,其来源复杂,而且质量参差不齐,因此,有必要对骨碎补药材的来源、质量标准、控制方法等进行研究,以确保骨碎补药材的质量稳定、可靠。《中国药典》(2010版)规定以柚皮苷为指标成分,但一些混淆品如中华槲蕨(D.sinica Diels),也含有柚皮苷。所以,单一成分的含量测定已不能满足对其质量的全面控制,亟需建立一套系统的、综合的方法对其质量进行分析和评价。
　　 本文通过查阅中国植物志、古籍论著及相关的期刊文献,整理大量槲蕨及其混淆品的标本资料,进行了槲蕨的本草考证,并对其化学及药理学研究进展进行了综述。在此基础上,设计了骨碎补药材的市场调查方案,前往河北安国、安徽毫州进行市场调查,并结合文献资料及标本记录分析了槲蕨的生态习性、资源分布、混淆品、产量、销售等情况。
　　 同时,我们以采自湖北五峰的槲蕨的根茎为研究对象,采用硅胶和凝胶等色谱分离技术,对其75％乙醇的提取物进行了分离纯化,得到7个单体化合物和1个甾体混合物,通过理化、波谱解析和文献对照等方法确定了它们的结构,分别为:山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷7-O-a-L阿拉伯呋喃糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside-7-O-α-L-arabinofuranoside),柚皮苷(naringin),新北美圣草苷(neoeriocitrin),5,7-二羟基色原酮-7-O-芸香糖苷(5,7-dihydroxychromone-7-O-rutinoside),香豆酸-4-O-β-吡喃葡萄糖苷(trans-p-coumaric acid-4-O-β-D—glucopyranoside),咖啡酸-4-D-β-D-葡萄糖苷(caffeic acid-4-O-β-D—glucopyranoside),D-(+)-半乳糖[D-(+)-Galactose],豆甾醇(stigmasterol),β-谷甾醇(β-sitosterol)。其中5,7-二羟基色原酮-7-O-芸香糖苷是首次从该属植物中分到的。
　　 另外,我们建立了槲蕨根茎中4种成分(咖啡酸-4-O-β-D-葡萄糖苷,5,7-二羟基色原酮-7-O-芸香糖苷,新北美圣草苷和柚皮苷)含量测定的RP-HPLC方法。系统地考察了方法的提取条件和色谱条件,确定提取条件为:70％乙醇-水溶液超声提取45 min。色谱条件为:色谱柱MZ-C18(4.6×250 mm,5μm)；流动相为乙腈(A):水+0.2％冰醋(B)梯度洗脱0→8 min,8％A→15％A；8→15 min,15％A→20％A；15→30 min,20％A持续15 min；30→36 min,20％A→43％A；36→45 min,43％A→70％A,流速1.0 mL/min；柱温25℃；检测波长260 nm。咖啡酸-4-O-β-D-葡萄糖苷,5,7-二羟基色原酮-7-O-芸香糖苷,新北美圣草苷和柚皮苷分别在10.00～100.00μg/mL(r2=0.9994),0.30～6.00μg/mL(r2=0.9998),6.72～67.20μg/mL(r2=0.9999)和24.80～248.00μg/mL(r2=0.9998)范围内与峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=5)分别为102.23％(RSD=1.10％),100.67％(RSD=1.86％),101.95％(RSD=1.78％)和98.12％(RSD=1.88％)。应用该方法对10批不同产地的槲蕨根茎中的4种成分进行了含量测定。
　　 最后,我们应用高效液相色谱法建立了槲蕨根茎的化学指纹图谱,对10批不同产地槲蕨根茎进行HPLC指纹图谱分析,得到13个共有峰,指认了其中5个,应用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A版》软件进行数据处理,对不同产地的槲蕨根茎进行了相似度分析,10批槲蕨根茎的相似度均大于0.94。
　　 中药的药效物质基础是其中包含的成百上千的化学成分,故只进行单一成分的含量测定已经不能全面评价药材的质量。应用现代色谱、波谱分析手段建立中药的化学成分指纹图谱,是实现中药质量控制的有效方法。本论文对槲蕨根茎的化学质量控制方法进行深入研究,旨在补充和完善槲蕨现行质量标准,这种多成分定量和指纹图谱分析相结合的研究方法,为更准确、更全面地评价槲蕨的质量提供了依据。