胰腺癌候选免疫原性膜抗原——Prohibitin生物学功能研究及预后分析

摘要

背景与目的：
　　 胰腺癌是消化系统恶性程度极高、预后极差的肿瘤，其发生发展机制尚未阐明。本实验室前期在胰腺癌患者血清中筛选出Prohibitin可能为胰腺癌相关免疫原性膜抗原。Prohibitin广泛分布于各种真核细胞中，其氨基酸结构保守，既发挥分子伴侣作用，也具有负性转录调控作用。其对细胞代谢、生长、分化、衰老以及凋亡等诸多方面发挥着重要的调控作用，与某些肿瘤的发生、发展有关。本研究拟探讨Prohibitin同胰腺癌生物学行为以及化疗耐药之间的关系，以及Prohibitin蛋白表达水平与胰腺癌临床病理特点及预后之间的关系。
　　 材料与方法：
　　 应用Real-time PCR和Westem blot检测Prohibitin mRNA及蛋自在9株胰腺癌细胞株中的表达水平。选用胰腺癌细胞株AsPC-1和MIAPaCa-2作为实验研究对象，应用siRNA干扰技术使prohibitin(phb)基因表达沉寂，观察干预前后胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化，以及对于吉西他滨和5-FU化疗敏感性的变化。通过Annexin V/PI双染法检测凋亡、Caspase-3活性测定以及Westem blot检测凋亡通路相关调控蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2在phb基因沉默后吉西他滨作用时表达水平的变化。收集北京协和医院31例胰腺患者血清标本和31健康志愿者的血清标本，检测血清中Prohibitin蛋白的含量；同时收集66例胰腺导管腺癌标本，采用免疫组织化学方法检测Prohibitin蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达情况并评价其与患者临床病理以及预后指标的相关性。
　　 结果 ：
　　 Prohibitin mRNA和蛋白在9株胰腺癌细胞中均明确表达。phb基因沉默后胰腺癌细胞增殖减弱，迁移和侵袭能力下降；phb基因沉默后胰腺癌细胞对吉西他滨和5-FU化疗敏感性降低，促进耐药；phb基因沉默后吉西他滨作用时细胞凋亡率明显降低，Caspase-3活性明显降低，促凋亡蛋白PARP、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Caspase-9表达水平显著下调，抑凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著上调，差异都具有统计学意义。胰腺癌患者血清中Prohibitin蛋白含量显著增高(P＜0.001)。Prohibitin蛋白在胰腺癌肿瘤组织中呈高表达(P=0.009)，并与远处转移相关。Kaplan-Meier生存分析显示Prohibitin蛋白高表达提示患者预后不良，单因素及多因素分析证实其为影响预后的独立危险因素。
　　 结论：
　　 phb基因同胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关，发挥促癌作用。phb基因可通过内部应激途径激活凋亡从而增加胰腺癌细胞的化疗敏感性。胰腺癌患者血清中Prohibitin显著高表达，可能作为新的诊断标记物，Prohibitin高表达与肿瘤转移相关，提示患者预后不良，可作为预测预后的独立指标。