基于“MD-ABS”联用技术研究三七总皂苷及其有效组分对丹参素药代动力学特性的影响

摘要

丹参与三七是传统中药的常用药对，临床上用于治疗心脑血管疾病。丹参与三七在药效学方面已经进行了广泛而深入的研究，而在脑内药代动力学的相互作用上研究较少。为研究其主要活性成分丹参素和三七总皂苷及其有效成分的药代动力学特性，采用微透析采样技术与自动采血技术联合LC-MSn方法，分别比较了丹参素单用、丹参素与三七总皂苷合用以及丹参素与三七总皂苷有效成分（人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1）合用后，对大鼠体内丹参素药代动力学特性的影响，探讨三七总皂苷及其有效成分对丹参素药动学行为的影响及其影响规律。
　　 本研究主要分为以下四部分:
　　 第一部分丹参素与三七总皂苷有效成分在生物样品中测定方法的建立
　　 实验目的:旨在建立测定丹参素、三七总皂苷有效成分(Rb1、Rg1、R1)在人工脑脊液(aCSF)及血浆中的LC-MSn方法。
　　 实验方法:选用Agelient Eclipse Plμs-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm)，乙腈和0.03％甲酸作为流动相，梯度洗脱，流速为0.3 mL· min-1，丹参素进样量为20μL、皂苷类进样量为10μL。采用电喷雾电离源(ESI)，扫描方式为MRM，丹参素采用[M-H]-、皂苷类成分采用[M+Na]+。用于定量分析的离子反应分别为丹参素m/z197.2→ m/z135.1，内标对羟基苯甲酸m/z137.0→ m/z93.0; Rg1 m/z824.3→ m/z644.5,Rb1 m/z1131.5→m/z366.5,R1 m/z956.6→ m/z776.6，内标地西泮m/z285.2→m/z154.1。100μL血浆样品加入内标，以5％HC1/10％HCl+乙酸乙酯进行液液萃取，离心取上清挥干复溶、检测;20μL aCSF样品加入内标、0.03％甲酸40μL，直接进样。
　　 实验结果:aCSF中丹参素、Rb1、Rg1、R1的线性范围分别为0.025-3.2、0.062-3.97、0.015-3.97、.062-3.97μg·mL-1;血浆中丹参素、Rb1、Rg1、R1的线性范围分别为0.010-50.0、1.56-50、0.048-50.0、1.56-50.0μg·mL-1，皆具有良好的线性关系。通过LC-MSn方法测定了PNS中的Rg1、Rb1、R1的含量，其含量分别为14.9％、48.9％、3.1％，三者在PNS中的总含量为66.9％。
　　 结论:本部分建立了aCSF、血浆中丹参素与皂苷类成分的LC-MSn检测方法，该LC-MSn检测方法具有简便、高效、稳定的特点，可应用于生物样品的测定。
　　 第二部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内丹参素的药代动力学特性
　　 实验目的:本部分旨在通过脑微透析法联合自动采血技术研究大鼠体内丹参素的药代动力学特征。
　　 实验方法:通过MD-ABS技术联合LC-MSn分析方法，微透析探针植入大鼠侧脑室，连续收集静脉注射药物（丹参素剂量为50 mg·kg-1）后的透析液样品及血液样品（按5，15，30，60，90，120，240，300，360，480 min采血点进行采样），采用LC-MSn测定DSS的浓度，经回收率校正后，用WinNonlin药动学软件计算主要药动学参数。
　　 实验结果:丹参素在脑内的ke、t1/2、 AUC0-∞、MRT分别为0.018 min-1、58.76 min、80.32 min·μg· mL-1、79.97 min;血浆中的ke、t1/2、 AUC0-∞、 MRT分别为0.04 min-1、16.64 min、813.97 min·μg·mL-1、15.28 min。
　　 结论:DSS在大鼠体内消除迅速。MD-ABS联用，较好的反映了丹参素在血液及大脑中的动力学特征，为丹参素与三七总皂苷及其有效成分的药动学特性研究奠定基础。
　　 第三部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内三七总皂苷对丹参素药代动力学特性的影响
　　 实验目的:旨在通过ABS-MD联用，结合LC-MSn测定方法，研究大鼠体内三七总皂苷对丹参素药代动力学特征的影响，可同时获得丹参素与三七总皂苷在血液、脑组织中的药动学参数，从而更加全面地阐释三七总皂苷对丹参素药动学特性的影响。
　　 实验方法:通过MD-ABS技术联合LC-MSn分析方法，微透析探针植入大鼠侧脑室，连续收集静脉注射药物（丹参素、PNS剂量皆为50 mg·kg-1）后的透析液样品及血液样品（按5，15，30，60，90，120，240，300，360，480 min采血点进行采样），采用LC-MSn测定DSS及Rb1、Rg1、R1的浓度，经回收率校正后，用WinNonlin药动学软件计算主要药动学参数。
　　 实验结果:DSS与PNS合用后，DSS在大鼠脑内的ke、t1/2、 AUC0-∞、 MRT分别为0.018 min-1、58.14 min、126.37 min·μg·mL-1、73.89 min; DSS在血浆中的ke、t1/2、 AUC0-∞、MRT分别为0.01 min-1、84.95 min、2653.6 min·μg· mL-1、97.52 min,与DSS组的主要药代参数进行统计学分析比较，发现脑内DSS二者无明显差异;在血浆中二者的ke、t1/2、 MRT具有显著性差异。PNS的主要成分Rb1、Rg1、R1在脑组织中未检测到，Rb1、Rg1、R1在血浆中的主要药动参数如下:t1/2分别为74.83、38.82、22.13 min，AUC0-∞分别为1881.8、17.17、131.84 min·μg·mL-1，MRT分别为282.62、92.80、31.32min。
　　 结论:PNS使DSS在脑组织、血浆中的消除减缓，说明PNS对脑内、血浆中的DSS药动学行为的影响具有一致性。同时，DSS对血浆中PNS有效成分Rb1、Rg1、R1的药动学行为无明显影响。
　　 第四部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内三七总皂苷有效成分对丹参素药代动力学特性的影响
　　 实验目的:探讨PNS有效成分对大鼠体内DSS药动学特性影响及其影响规律。
　　 实验方法:本部分以DSS+Rg1（50 mg·kg-1）合用组、DSS+Rb1（50 mg· kg-1）合用组、DSS+R1（10 mg·kg-1）合用组、DSS+Rb1(24.5 mg·kg-1)合用组、DSS+R1(1.55 mg·kg-1)合用组为研究对象，通过MD-ABS技术联合LC-MSn分析方法测定大鼠体内DSS及PNS有效成分的药物浓度，用WinNonlin药动学软件计算主要药动学参数。
　　 实验结果:DSS+Rg1(50 mg·kg-1)合用组、DSS+Rb1(50 mg·kg-1)合用组、DSS+R1(10 mg·kg-1)合用组、DSS+Rb1(24.5 mg·kg-1)合用组、DSS+R1（1.55 mg·kg-1）合用组中大鼠体内DSS的主要药动学参数如下:脑内:t1/2分别为42.04、55.15、29.58、23.63、29.57 min, AUC0-∞分别为58.14、37.96、27.79、33.38、31.51 min·μg· mL-1,MRT分别为57.70、57.90、45.80、28.79、33.50 min;血浆中:t1/2分别为12.22、18.70、7.92、18.39、43.66 min, AUC0-∞分别为705.72、918.67、667.64、1074.1、1268.5 min·μg· mL-1。结果显示，这些组合用药皆使大鼠脑内、血浆中的DSS t1/2、AUC发生了改变。DSS+Rg1(50 mg·kg-1)合用组、DSS+Rb1(50 mg·kg-1)合用组、DSS+R1(10 mg·kg-1)合用组中血浆中的Rg1、Rb1、R1的主要药动学参数如下:t1/2分别为20.94、343.87、9.05 min，AUC0-∞分别为2891.2、78176、192.11 min·μg·mL-1。DSS+Rg1（50 mg·kg-1）合用组、DSS+Rb1（50 mg·kg-1）合用组中脑内Rg1、Rb1的主要药动学参数为:t1/2分别为65.91、140.3 min，AUC0-∞分别为56.37、939.27min·μg· mL-1。DSS+R1（10 mg·kg-1）合用组的R1在脑内可检测到，但其浓度低于定量。
　　 结论:PNS中的Rb1(50 mg·kg-1)、Rg1（50 mg·kg-1）、R1（10 mg·kg-1）皆使大鼠脑内、血浆中的DSS的AUC减少、消除半衰期缩短、消除加快;而Rb1(24.5mg· kg-1)和R1（1.55 mg·kg-1）使脑内DSS的AUC减少、血浆中的AUC增加。表明PNS使脑内丹参素的AUC增加、消除半衰期延长、消除速率减缓，可能由PNS中的其他活性成分引起的。脑内Rb1、Rg1较为完整的药动学参数为国内外首次报道。

目录

声明

缩略词表

摘要

前言

第一部分 丹参素与三七总皂苷有效成分在生物样品中测定方法的建立

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内丹参素的药代动力学特性

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内三七总皂苷对丹参素药代动力学特性的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第四部分 MD-ABS联用技术研究大鼠体内三七总皂苷有效成分对丹参素药代动力学特性的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

结语

文献综述 微透析技术在脑内药物代谢动力学及脑缺血研究中的应用

附录

致谢