吉林地区妇女妊娠晚期及新生儿EB病毒感染状况研究

摘要

EB(Epstein-Barr)病毒感染与一些肿瘤疾病有密切的病因学关系，如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌等。该病毒在人群中感染极其普遍，感染后可以终身携带病毒抗体标记，迄今无有效的疫苗可以预防。经口唾液传播是目前公认的EB病毒主要传播途径，但EB病毒能否通过宫内、产道或乳汁垂直传播目前仍不明确。在中国的非鼻咽癌高发区——北方地区，对于婴幼儿EB病毒感染的流行病学调查资料十分匮乏。本研究收集吉林当地常住妇女妊娠晚期及其新生儿配对的血样本，并对该样本进行血清抗体、DNA水平的相关测定，掌握吉林地区妊娠晚期妇女及新生儿EB病毒感染状况。通过母婴检测结果对比，寻找EB病毒垂直传播的相关证据。为新生儿EB病毒感染筛查，改善EB病毒感染诊治水平及EB病毒疫苗的研发提供科学依据。 研究共收集500对母婴样本，其中，母亲留取血清1.5ml，新生儿针刺足底留取滤纸干血片1张。样本进行酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测EB病毒抗体VCA-IgG，NA-IgG，EA-IgG，VCA-IgM，统计产妇及新生儿的抗EB病毒抗体阳性率，并据抗体谱分类将母亲区分为急性感染、既往感染和未感染三大类。此外，研究提取新生儿滤纸干血片DNA，采用实时荧光定量PCR方法检测EB病毒DNA拷贝数。对母婴临床资料进行回顾，按胎龄、出生方式、喂养方式等不同层面统计EB病毒的感染状况。运用统计学分析软件SAS9.2进行统计处理，组间比较采用x2检验，P＜0.05有统计学意义。 研究结果显示，500对符合设定要求的母婴研究样本中，产妇有468例(93.6％)样本的抗体谱提示EB病毒感染，急性感染和既往感染分别有109例(21.8％)和359例(71.8％)，产妇的EB病毒急性感染率在本地区存在季节差异，秋冬季的急性感染率(27.8％)高于春夏季(11.1％)，差异具有统计学意义(P＜0.05);新生儿样本中，提示EB病毒既往感染的EBV-CA-IgG抗体及EBNA-IgG抗体分别有466例(93.2％)和392例(78.4％);提示EB病毒急性感染的EB-EA-IgG抗体及EBV-CA-IgM抗体分别有26例(5.2％)和4例(0.8％)。EB病毒抗体结合EBV-DNA检测结果分析，新生儿EB病毒感染率为0.4％;根据4种抗体的结果，伴随胎龄增加，新生儿VCA-IgG抗体的阳性率呈现缓慢升高的趋势，差异具有统计学意义(P＜0.05)，在38周，VCA-IgG抗体阳性率首次超过90％，达到与成人相当的水平。 母婴成对抗体检测结果对比方面，按出生方式区分，自然分娩出生的新生儿四种抗体的阳性率均略高于剖宫产的新生儿，但差异不具有统计学意义(P＞0.05);按喂养方式区分，提示既往感染的EB-VCA-IgG抗体阳性率及该抗体母婴阳性匹配率在母乳喂养组中均高于非母乳喂养组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，表明EB病毒存在母乳的垂直传播途径。研究考虑了生产方式及喂养方式对新生儿EB病毒抗体的影响。通过母婴成对结果对比，证明胎盘、乳汁等途径对EB病毒抗体垂直传播均会产生一定影响，进而影响新生儿的EB病毒感染状态。 研究结果描绘2013年4月至12月吉林地区产妇及其新生儿EB病毒感染状况。该地区产妇EB病毒的感染率与目前公认的我国正常成年人感染率基本持平;但仍高于西方发达国家。产妇及新生儿EB病毒感染的数据在东北地区是第一次获得，既往无比较先例，可以作为基线数据，供今后研究参考。 在500份新生儿研究样本中，EB病毒DNA弱阳性样本2例，占0.4％，低于抗体谱的阳性率。由于实时荧光定量PCR方法检测EB病毒DNA拷贝数仅在病毒活跃复制时才能检测到，在以无症状的病毒携带者为主的正常新生儿中进行筛查，其对病毒感染状态提示意义较为有限，需结合抗体谱及临床信息具体分析。 滤纸干血片法检测新生儿EB病毒抗体及DNA，弥补了传统方式的不足，为未来扩大EB病毒感染筛查及开展新生儿EB病毒感染早期诊断提供了借鉴。

目录

摘要

第1章 引言

1．1 研究意义

1．2 国内外相关研究结果述评

1．3 拟解决的关键问题

1．4 主要理论和方法

1．5 论文结构

第2章 研究对象和方法

2．1 研究对象

2．1．1 对象来源

2．1．2 样本收集

2．2 研究方法

2．2．1 母婴EB病毒相关抗体联合检测

2．2．2 PCR法检测新生儿EB病毒DNA情况

2．2．3 EB病毒母婴传播相关性分析

2．3 技术路线

第3章 实验结果

3．1 母婴基本情况及临床信息

3．2 母婴EB病毒相关抗体联合检测结果

3．2．1 ELISA法检测滤纸干血片EB病毒抗体的预实验结果

3．2．2 ELISA法检测母婴EB病毒各抗体的阳性例数及阳性率

3．2．3 产妇EB病毒血清学感染状态分类

3．3 实时荧光定量PCR检测新生儿滤纸干血片EBV-DNA拷贝数

3．3．1 预实验结果

3．3．2 新生儿EBV-DNA拷贝数检测结果及其与EBV抗体谱关系

3．4 母婴EB病毒抗体相关性研究结果

第4章 讨论

4．1 研究对象的选择和统计学处理

4．2 母婴EB病毒抗体谱及EB病毒感染状况分析

4．3 母婴EB病毒抗体的相关性

4．4 滤纸干血片法检测EB病毒抗体及DNA的应用价值

4．5 展望

第5章 结论

参考文献

附录1：英文缩写词

附录2：新生儿EB病毒先天感染的研究进展

附录3：血液标本采用知情同意书

致谢

声明