摘要
1.引言
1.1 糖尿病神经病理性疼痛的表现及其对社会的影啊
1.2 加巴喷丁治疗糖尿病神经病理性疼痛的机制及效果
1.3 T型钙通道介导糖尿病神经病理性疼痛的产生
1.4 加巴喷丁可能通过蛋白激酶C影响T型钙通道,进而影响其自身镇痛效果
1.5 本课题组加巴喷丁治疗神经病理性疼痛相关前期研究
2.技术路线
3.材料和方法
3.1 糖尿病神经病理性疼痛模型
3.1.1 实验动物和材料
3.1.2 糖尿病模型建立
3.1.3 体重
3.1.4 机械刺激诱发痛测定
3.1.5 热刺激诱发痛测定
3.1.6 处死动物及标本
3.2 总RNA提取
3.2.1 实验材料
3.2.2 组织总RNA提取
3.2.3 紫外分光光度仪测定RNA浓度与质量鉴定
3.2.4 琼脂糖电泳测定RNA完整性
3.3 荧光实时定量PCR测定相关基因cDNA变化
3.3.1 实验材料
3.3.2 RNA逆转录为cDNA
3.3.3 荧光实时定量PCR
3.3.4 荧光实时定量PCR结果分析
3.3.5 荧光实时定量PCR扩增DNA电泳鉴定
3.4 Western-Blot测定相关蛋白质水平变化
3.4.1 实验材料
3.4.2 蛋白样品制备
3.4.3 蛋白含量测定
3.4.4 SDS-PAGE电泳
3.4.5 转膜
3.4.6 封闭
3.4.7 免疫反应
3.4.8 化学发光
3.4.9 图像分析
3.5 统计学方法
4.结果
4.1 糖尿病模型的建立及行为学监测
4.1.1 糖尿病模型的建立及体重变化
4.1.2 糖尿病大鼠机械缩足阈值的监测
4.1.3 糖尿病大鼠热缩足潜伏期的监测
4.2 米贝拉地尔可治疗1型糖尿病大鼠神经病理性疼痛
4.2.1 米贝拉地尔可改善1型糖尿病大鼠机械痛敏
4.2.2 米贝拉地尔可改善1型糖尿病大鼠热痛敏
4.3 加巴喷丁可治疗1型糖尿病大鼠神经病理性疼痛
4.3.1 加巴喷丁治疗并不影响1型糖尿病大鼠体重变化
4.3.2 加巴喷丁可改善1型糖尿病大鼠机械痛敏
4.3.3 加巴喷丁可改善1型糖尿病大鼠热痛敏
4.4 联合应用加巴喷丁和米贝拉地尔可显著增强加巴喷丁镇痛效果
4.4.1 联合应用加巴喷丁和米贝拉地尔可显著改善1型糖尿病大鼠机械痛敏
4.4.2 联合应用加巴喷丁和米贝拉地尔可显著改善1型糖尿病大鼠热痛敏
4.5 糖尿病建模不成功的大鼠亦出现显著的机械及热痛敏
4.6 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG及脊髓背角内CACNA1H及PKCγ基因mRNA表达量
4.6.1 RNA的提取及质量鉴定
4.6.2 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG内cACNA1H基因mRNA表达量
4.6.3 加巴喷丁可降低糖尿病神经病理性疼痛大鼠DRG内PKCγ基因mRNA表达量
4.6.4 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠脊髓背角内CACNA1H mRNA表达量
4.6.5 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠脊髓背角内PKCγ mRNA表达量
4.6.6 Real-Time PCR检测CACNA1H、PKCγ、GAPDH基因扩增结果
4.6.7 1%琼脂糖凝胶电泳检测CACNA1H、PKCγ、GAPDH基因扩增产物
4.7 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG内Cav3.2及PKCγ蛋白质表达量
4.7.1 蛋白浓度测定
4.7.2 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG内Cav3.2蛋白质表达量
4.7.3 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG内PKCγ蛋白质表达量
5.讨论
5.1 糖尿病模型的建立及行为学监测
5.2 米贝拉地尔可改善糖尿病大鼠机械及热痛敏
5.3 加巴喷丁可改善糖尿病大鼠机械及热痛敏而不影响大鼠体重
5.4 联合加巴喷丁及米贝拉地尔可增强加巴喷丁镇痛效果并延长其作用时间
5.4.1 联合加巴喷丁及米贝拉地尔可增强加巴喷丁对糖尿病大鼠机械痛敏镇痛效果并延长其作用时间
5.4.2 联合加巴喷丁及米贝拉地尔可增强加巴喷丁对糖尿病大鼠热痛敏镇痛效果并延长其作用时间
5.5 糖尿病建模不成功的大鼠亦出现显著的机械及热痛敏
5.6 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG及脊髓背角内CACNA1H及PKCγ基因mRNA表达量
5.7 加巴喷丁可降低糖尿病大鼠DRG内Cav3.2及PKCγ蛋白质表达量
6.结论
参考文献
英文缩略词表
综述 T型钙通道:糖尿病神经病理性疼痛干预的新靶点
致谢
声明