系统性硬皮病的云数据库创建、临床数据分析、全血miRNA筛查与靶基因预测

摘要

背景和目的:系统性硬皮病(系统性硬化症，SSc)是一类以皮肤、内脏器官（肺、心脏、消化道、肾脏等）进行性纤维化为主要表现的自身免疫性结缔组织病(AI-CTD)，可由于广泛的器官受累引起皮肤硬化、肢体残障及脏器功能衰竭。目前对该病的发病机制的研究尚处于探索阶段，缺乏行之有效的治疗手段。本研究旨在研发适用于SSc临床研究的云数据库（网络数据库），科学化采集并分析疾病临床数据，同时评估SSc患者健康相关生活质量，并进行全血miRNA深度测序、靶基因预测及GO分析等，以便全面认识病情并寻找可能的治疗靶点。
　　方法:
　　1、根据临床需求建立以SSc为范例的新型网络数据库——云数据库，首先通过纸质表格搜集患者个人情况、图片资料、标本信息、血生化指标、皮肤系统受累情况及自评量表计分等，随后进行云数据库的数据录入、分析、计算;在此过程中改进云数据库结构框架及逻辑关系，总结云数据库在皮肤科患者信息管理中的应用经验。
　　2、以云数据库资料为基础进行SSc流行病学的描述性研究:搜集205例SSc患者的个人信息及临床资料，对性别、发病年龄、病程、临床表现、重要辅助检查结果等进行描述及分析。搜集90例SSc患者及50例健康对照的基本资料，分组进行HAQ-DI量表、VAS量表及SAQ量表的自评打分，87例SSc患者及50例健康对照进行SF-36量表的自评打分;使用秩和检验等统计学方法对量表结果进行比较和分析。
　　3、使用深度测序法检测8例中国汉族女性SSc患者和5例健康女性患者全血miRNA，确定组间具显著表达差异的miRNAs，使用cytoscape等分析软件及DAVID Bioinformatics Resources6.7等生物信息学网站进行靶基因预测及GO分析。
　　结果:
　　1、成功创建了针对SSc临床研究的云数据库，实现了多点操作和异地存储等复杂应用。搜集、收录并处理了205例患者个人资料及临床信息。
　　2、临床研究结果(1)描述性研究结果:205例患者中性别比例男∶女约为1∶9.1，发病年龄大于50岁者占42.65％，首发症状最多见为雷诺现象(77.06％)和皮肤硬化(49.49％);合并心脏呼吸系统、肾脏系统、消化系统同时受累的男性占男性患者的25.0％，高于合并多系统受累的女性患者比例(15.0％)，ANA及scl-70等免疫指标在不同临床亚型中阳性率不同，d-SSc患者（弥漫型）阳性率最高，分别为68.09％和51.06％。CREST综合征的患者100％出现了肺间质纤维化的影像学改变。
　　(2)健康相关生活质量研究结果:1.HAQ-DI量表结果显示在穿衣整饰、个人清洁及获取、握指等项目病例组较之对照组得分更高，即患者的精细机体功能较健康人群明显受损。VAS量表各项得分病例组均明显高于对照组，表明疼痛感及雷诺现象等症状严重影响患者生活质量。SAQ量表的四系统独立得分（血管系统、呼吸系统、消化系统、肌肉骨骼系统）存在明显组间差异，病例组均高于对照组，表明患者存在多系统功能减退。2.SF-36量表结果显示患者在生理机能、生理职能、躯体疼痛、一般健康状况、精力、社会功能、情感职能、精神健康状况等各项得分均低于对照组，其中d-SSc组得分最低，HRQOL受损最严重;健康变化得分不具有组间差异。
　　3、病例组（B组）的miRNA的表达与对照组（C组）存在差异:BⅠ组vsC组出现表达差异的miRNA共94个，其中上调37个，下调57个;BⅡ组vsC组出现表达差异的miRNA共82个，其中上调26个，下调56个。两组具显著表达差异的miRNA对应的靶基因重叠部分经过GO分析及功能富集共得到相互作用通路的21个靶基因及功能作用蛋白，其中包含5个靶基因:ACVR2B、BMP7、BMPR2、HGP与TNF，这5个靶基因分别指向6个miRNA:miR24-2-5p，miR1976，miR671-5p,miR939-5p,miR1229及miR491-5p。
　　结论：
　　1、云数据库可以高效的储存并处理以SSc为代表的自身免疫性皮肤病患者的资料、数据、图片等，数据导出与计算快捷灵活、使用方便，其实际应用对信息管理、临床科研及医疗决策具有重要意义。
　　2、临床研究结论
　　(1)描述性研究结论:SSc女性发病率明显高于男性，但男性患者病情更为严重，多系统受累更常见。50岁以上人群的发病率较高，常见的首发症状为雷诺现象和皮肤硬化。弥漫型SSc患者的ANA和scl-70阳性率较其他亚型更高。CREST综合征患者肺部影像学结果阳性率最高。
　　(2)健康相关生活质量研究结论:SSc患者较之健康人群的健康生活质量存在明显下降，这种下降与与生理机能下降、心理状况变化及社会适应能力减退存在显著关联性。
　　3、BMP7、BMPR2、HGP、TNF的表达量与SSc的血管内皮病变、肺间质纤维化、成纤维细胞功能异常密切相关，miR1976，miR671-5p，miR939-5p，miR1229及miR491-5p在上述过程中的作用机制有待进一步研究与验证。

目录

中英文缩略词表(Abbreviation)

摘要

前言

第一部分 系统性硬皮病云数据库的创建与临床应用

前言

资料和方法

结果

讨论

结论

第二部分 系统性硬皮病的描述性研究及健康相关生活质量研究

前言

研究对象和方法

结果

讨论

结论

第三部分 中国汉族女性患者全血miRNA深度测序与靶基因预测

前言

研究背景

结果

讨论

全文小结

参考文献

综述一 系统性硬化患者的生活质量评估

综述二 CD8+T细胞在系统性硬皮病组织纤维化中的作用

综述三：短链非编码RNA在系统性硬皮病皮肤组织硬化过程中的作用

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