阴离子交换转运蛋白Pendrin在急性肺损伤小鼠模型中的作用和干预研究

摘要

目的:
　　研究表明急性肺损伤/ARDS时患者存在气道尤其是小气道的功能受损和障碍，如气道阻力升高，产生存在内源性呼气末正压和/或呼吸系统压力-容积曲线拐点较低等，其与气道炎症、细胞外基质重塑和上皮剥脱有关。且研究证实气道上皮和肺泡上皮在炎症发生发展的演变过程中存在相似的生物学特性，急性肺损伤/ARDS时气道上皮的炎症等过程可能对ARDS的发生发展发挥重要作用。故气道上皮细胞可能可作为靶点用于发掘治疗急性肺损伤/ARDS的新药物和新的治疗策略。现已明确存在于气道上皮的阴离子转运蛋白Pendrin(SLC26A4)参与哮喘、COPD、百日咳等呼吸系统疾病的病生理学过程。至今，尚无Pendrin(SLC26A4)在急性肺损伤/ARDS作用和地位的研究。Pendrin(SLC26A4)是否在肺泡上皮表达也不得而知。
　　本研究的目的旨在揭示Pendrin(SLC26A4)在急性肺损伤/ARDS的作用，同时明确该蛋白是否在肺泡上皮表达，明确气道上皮Pendrin(SLC26A4)是否可作为靶点用于急性肺损伤的治疗。
　　方法:
　　气管内滴注LPS诱导构建急性肺损伤C57BL/6小鼠模型。利用ELISA、CBA流式技术等检测肺组织和BALF中炎症指标，如组织学、炎症因子、BALF总蛋白和白细胞含量、肺水肿程度等评估模型。应用RT-PCR和Westem蛋白印迹、免疫组化、免疫荧光技术检测分析Pendrin在肺组织中的转录和表达，并利用免疫荧光双标定位技术确定肺泡上皮是否存在Pendrin的表达。LPS造模后1h用Pendrin的抑制剂醋甲唑胺(5mg/kg)皮下注射，每12h重复一次。应用ELISA、CBA流式技术等评估分析肺部急性炎症指标。每组实验均设计对照，并重复3次。模型和干预的观察时长均为48h。应用GraphPad Prism6.0软件进行数据统计分析和作图，符合正态分布的数据资料采用配对/非配对t检验分析比较组间差异，对不符合正态分布的数据进行变量转换为正态分布进行分析，P＜0.05认为具有统计学差异。
　　结果:
　　气管内滴注LPS可稳定构建急性肺损伤小鼠模型。与PBS组相比，LPS模型组肺组织SLC26A4基因的转录和Pendrin蛋白的表达明显上调。醋甲唑胺干预可减轻缓解肺部弥漫性肺泡损伤的病理改变，降低肺组织和BALF中炎症因子IL-6和MCP-1的浓度，减少肺组织MPO的分泌，使BALF中总蛋白含量和肺湿干比降低。醋甲唑胺干预后BALF中分类细胞计数巨噬细胞的比例增加。利用免疫荧光双标技术在ATⅡ细胞上定位到Pendrin的少量表达。
　　结论:
　　Pendrin可能参与LPS诱导的急性肺损伤的炎症病理过程。作为治疗靶点，抑制Pendrin的表达和功能可用于急性肺损伤的治疗。Pendrin在肺泡上皮的少量表达及其作用有待进一步揭示。该结果提示气道上皮细胞可作为靶点用于发掘治疗急性肺损伤/ARDS的新药物和新的治疗策略。

目录

摘要

前言

第一部分 构建急性肺损伤小鼠模型

一、材料和方法

二、实验结果

三、实验结论

参考文献

第二部分 阴离子交换膜蛋白Pendrin在急性肺损伤小鼠模型中的表达

一、材料和方法

二、实验结果

三、实验结论

第三部分 Pendrin抑制剂醋甲唑胺干预急性肺损伤小鼠模型

一、材料和方法

二、实验结果

三、实验结论

第四部分 初步探讨LPS致急性肺损伤小鼠模型中Pendrin上调的机制

一、材料和方法

二、实验结果

三、实验结论

讨论

参考文献

综述(一) 阴离子交换转运蛋白Pendrin在呼吸系统疾病中的作用

综述(二) 急性肺损伤/ARDS时存在气道上皮功能损伤和障碍

中英文缩略词

攻读学位期间发表文章情况

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