滤泡性辅助性T细胞及其亚群在寻常型银屑病患者中的特征及意义

摘要

目的:观察银屑病患者中滤泡性辅助性T细胞(T follicular helper cells，Tfh cells)频率、Tfh细胞功能性分子（ICOS、PD-1、HLA-DR、Ki-67、IL-21、IL-17、IFN-γ、IL-10）、Tfh细胞亚群(Tfh1、Tfh2、Tfh17)、CD19+B细胞频率及CD19+B细胞表面IL-21R的表达特点，分析各检测指标与银屑病疾病严重程度的相关性，并观察在银屑病患者中Tfh细胞主要功能性细胞因子IL-21是否可以诱导CD4+T淋巴细胞向辅助性T细胞17(T helper17cells，Th17cells)分化及Tfh17细胞亚群与B细胞表面IL-21R表达水平间的关系，探讨Tfh细胞在银屑病免疫发病机制中的作用及临床意义。
　　方法:入组32位寻常型银屑病患者和13位健康对照者，分别定义为银屑病组和健康对照组。运用流式细胞技术检测两组人员外周血中Tfh细胞频率、Tfh细胞上功能性分子（ICOS、PD-1、HLA-DR、Ki-67、IL-21、IL-17、IFN-γ、IL-10）、Tfh细胞亚群(Tfh1、Tfh2、Tfh17)、CD19+B细胞频率及CD19+B细胞表面IL-21R表达的特征;运用免疫组织化学和免疫荧光的方法观察银屑病患者皮损区、非皮损区和健康对照者皮肤组织中Tfh细胞的浸润特点。分析患者外周血中Tfh细胞频率、皮损内Tfh细胞浸润数量、Tfh细胞亚群(Tfh1、Tfh2、Tfh17)、(Tfh17+Tfh2)/Tfh1比值与银屑病面积严重度指数(Psoriasis area severity index，PASI)的相关性，并观察Tfh17细胞亚群与B细胞表面IL-21R表达水平间的关系。此外，对24位中重度银屑病患者（PASI评分＞10）采用阿维A胶囊、中药汤剂口服及卡泊三醇软膏、糠酸莫米松乳膏外用治疗，观察患者治疗1月后Tfh细胞频率及其功能分子IL-21、IL-17、IFN-γ的变化特点。IL-21为Tfh细胞主要的功能性分子，为进一步探讨Tfh细胞在银屑病免疫发病机制中的作用，将IL-21与银屑病患者及健康对照者外周血中CD4+T淋巴细胞体外共培养，观察IL-21是否可以促进CD4+T淋巴细胞向Th17细胞分化。
　　结果:银屑病患者外周血中Tfh细胞频率显著高于健康对照组(P＜0.05)，且与疾病严重程度呈正相关。与健康对照组相比，银屑病患者外周血中Tfh细胞上功能性分子（ICOS、PD-1、HLA-DR、Ki-67、IL-21、IL-17、IFN-γ）的表达水平明显升高（均P＜0.05），但Tfh细胞上IL-10的表达水平与健康对照组无明显差别(P＞0.05)。我们的结果还显示银屑病患者外周血中存在Tfh细胞亚群失衡现象。银屑病患者外周血中Tfh17细胞亚群频率较健康对照组明显升高(P＜0.05)，而Tfh1细胞亚群频率及Tfh2细胞亚群频率在银屑病组和健康对照组间无统计学差异（P＞0.05）。(Tfh17+Tfh2)/Tfh1比值在银屑病组中也明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。与银屑病严重程度相关性分析中发现，银屑病患者外周血中Tfh细胞频率、Tfh17细胞频率与PASI评分呈明显正性相关，而Tfh1细胞频率、Tfh2细胞频率、(Tfh17+Tfh2)/Tfh1比值与PASI评分间相关性无统计学意义。对B细胞的检测结果显示，CD19+B细胞频率在银屑病患者和健康对照者间无统计学差异（P＞0.05），但是CD19+B细胞上IL-21R表达的水平在银屑病患者外周血中显著升高(P＜0.05)，且与PASI评分呈正性相关。在银屑病患者外周血中CD19+B细胞上IL-21R表达的水平与Tfh17细胞频率间也有明显正性相关性。与健康对照者皮肤组织及银屑病患者非皮损区相比，银屑病患者皮损区Tfh细胞浸润数量明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，但与PASI评分无明显相关性，仅有随PASI评分升高而升高的趋势。在随访研究中发现，中重度银屑病患者经1月治疗后，Tfh细胞频率、Tfh细胞分泌的细胞因子IL-21、IL-17、IFN-γ的水平较治疗前明显降低(P＜0.05)。将部分健康对照者及银屑病患者外周血中CD4+T细胞纯化出来并分别与IL-21体外共培养，结果显示经IL-21细胞因子刺激后CD4+T细胞中Th17细胞比例明显升高(P＜0.05)。
　　结论:在银屑病患者外周血中Tfh细胞不仅频率增多，而且功能处于活化状态，其与银屑病疾病严重程度也具有显著相关性。在银屑病患者外周血中还存在Tfh细胞亚群失衡现象。在Tfh细胞的3个亚群中，主要是Tfh17细胞参与银屑病的发生发展，且与B细胞表面IL-21R的表达水平呈明显相关性。经1月治疗，随着银屑病患者皮损临床表现的好转，患者外周血中Tfh细胞频率降低，其功能性分子表达下降。此外，IL-21是Tfh细胞主要的功能性细胞因子，在银屑病中可以促进CD4+T细胞向Th17细胞分化。因此，Tfh细胞在银屑病免疫发病机制中具有重要作用，可能通过诱导CD4+T细胞向Th17细胞的分化及促进B细胞的活化参与疾病的发生发展。研究结果为银屑病发病机制的阐明提供了新思路，也为银屑病的治疗提供了新的潜在性靶点。

目录

摘要

前言

第一部分 银屑病患者中滤泡性辅助性T细胞的特征及意义

引言

材料和方法

实验结果

讨论

第二部分 银屑病患者外周血中滤泡性辅助性T细胞亚群的特征及意义

引言

材料和方法

实验结果

讨论

文献综述 CD4+T淋巴细胞亚群与银屑病关系的研究进展

参考文献

全文总结

缩略语

致谢

攻读博士学位期间发表的文章

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