正常肾组织蛋白质组学分析及淀粉样变性质谱诊断分型研究

摘要

目的:基于质谱的蛋白质组学技术已成为探索肾脏疾病发病机制及某些疑难肾脏疾病诊断的方法之一。目前利用激光显微切割联合质谱(Laser microdissection and mass spectromy,LMD/MS)技术对人肾小球进行蛋白质表达谱的研究有限，对肾髓质进行蛋白质组学表达谱的研究尚未见发表。采用LMD/MS技术不仅可分别获取肾小球及肾髓质组织以构建蛋白表达谱，也可对肾病变组织区域进行分析。近年来，利用LMD/MS技术发现一些新的淀粉样变亚型，使得淀粉样变分型诊断水平有所提高;同时对致淀粉样变蛋白进行氨基酸序列分析有可能发现变异的致淀粉样变蛋白。
　　方法:在第一部分工作中，收集6例癌旁肾组织，通过LMD/MS技术获取肾小球及肾髓质组织并构建蛋白质组表达谱;对两个部位所鉴定到的蛋白进行生物信息学分析。在第二部分工作中，分析了近5年45例AL型淀粉样变性病患者临床、实验室检查及肾活检病理结果，选取20例肾组织免疫荧光分型不明确的患者进行免疫组化及LMD/MS分型，评价免疫组化及LMD/MS在免疫荧光分型不明确的AL淀粉样变患者中的诊断意义。在第三部分工作中，对9例临床、实验室检查及肾组织免疫化学检查均不能分型的疑难肾淀粉样变患者进行LMD/MS分析，以期达到肾淀粉样变的完整分型诊断，并利用生物信息学方法对AA型淀粉样变病例的SAA蛋白进行变异氨基酸序列分析。
　　结果:第一部分中，肾小球及肾髓质分别鉴定到1373及1673种蛋白;与以往研究比较，本研究单独鉴定到472种肾小球蛋白，并首次建立了正常人类肾髓质蛋白质组表达谱。生物信息学分析显示肾小球蛋白多为细胞骨架蛋白，肾髓质蛋白多参与细胞代谢、具有酶解功能。第二部分中，发现应用免疫组化方法可对免疫荧光不能分型的部分AL型淀粉样变进行分型诊断，敏感性约为55％;对于部分免疫组化方法不能分型的AL型淀粉样变患者，LMD/MS技术仍可进行分型诊断;20例行LMD/MS分析的患者中，18例可明确分型诊断，敏感性为90％。第三部分中，9例疑难肾淀粉样变分型不明确的患者，经LMD/MS诊断出4例AL型淀粉样变，1例Apo AIV型淀粉样变，1例AA型淀粉样变及1例AH型淀粉样变;AA型淀粉样变患者淀粉样物质中包含SAA1及SAA2蛋白，未发现两种蛋白的氨基酸序列变异。
　　结论:本研究利用LMD/MS技术，对新鲜冰冻肾组织显微切割获取的肾小球及肾髓质组织进行蛋白质组学及生物信息学分析，丰富了肾小球蛋白质表达谱数据库，并首次建立了正常人类肾髓质蛋白质组表达谱。免疫组化染色及LMD/MS分析发现，对于免疫荧光不能分型的肾AL型淀粉样变病例，采用免疫组化的方法可改进分型诊断的水平。LMD/MS技术对于部分免疫化学方法不能分型的肾AL型淀粉样变病例可提供分型诊断，该技术能鉴定到淀粉样纤维的多种蛋白成分，也适用于少见类型的淀粉样变性的分型诊断并确证免疫荧光或免疫组化结果，具有一定的临床应用前景。

目录

摘要

中英文缩略词表

第一章 正常肾组织肾小球及肾髓质蛋白质组学分析

1 引言

技术路线

2 实验材料与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

第二章 AL型肾淀粉样变患者临床、病理及质谱分析

1 引言

技术路线

2 对象和方法

3 研究方法

4 结果

5 讨论

6 结论

参考文献

第三章 显微切割联合质谱技术在疑难淀粉样变中的应用

1 引言

技术路线

2 研究对象与方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

综述一 淀粉样变发病机制及诊断分型进展

综述二 激光微切割联合质谱分析在肾脏疾病诊断中的应用

附件

个人简历

致谢

声明