自噬在生精细胞中抑制外源基因表达及腮腺炎病毒复制中的功能

摘要

目的：外源基因在生精细胞中难以表达，腮腺炎病毒(mumps virus，MuV)不能在生精细胞中复制，提示生精细胞具有抵御外源基因及MuV感染的能力，但其机制并不清楚，本论文对此进行了初步探讨，重点研究了自噬在其中的作用。
　　材料与方法：分离C57雄性小鼠不同阶段的生精细胞，利用表达荧光蛋白的腺病毒载体和腮腺炎病毒(mumps virus，MuV)感染生精细胞。实时定量RT-PCR检测基因mRNA水平的表达，Western-blot测定基因的蛋白表达水平，免疫组织化学与免疫荧光定位蛋白的分布。
　　结果：腺病毒荧光蛋白可以在Sertoli细胞、Leydig细胞及早期精原细胞中表达，但不能在圆形精子细胞中表达。自噬相关基因Beclin-1及LC3在生精细胞中高表达。雷帕霉素（Rapamycin，Rap）促进细胞自噬后，可以抑制Sertoli细胞和Leydig细胞表达荧光蛋白;而3-甲基嘌呤(3-Methyladenine，3MA)抑制生精细胞自噬后，可以促进圆形精子表达荧光蛋白。MuV不能在生精细胞中复制，但经3MA处理生精细胞后，MuV则可以在生精细胞中复制。
　　结论：生精细胞具有高水平的自噬活性，既能抑制外源基因的表达，也可以限制MuV病毒的复制。本研究为认识生精细胞的天然抗病毒防御机制提供了新思路，并且解释了为什么外源基因在生精细胞中难以表达。

目录

摘要

缩略词

前言

1．睾丸结构与精子发生

2、睾丸与病毒转染

3、睾丸与自噬

一、实验材料

二、实验方法

实验结果

1．生精细胞的最适培养条件

2．腺病毒转染睾丸细胞

3．睾丸细胞的自噬情况

4．自噬对腺病毒转染睾丸Sertoli细胞和生精细胞的影响

5．自噬对腮腺炎病毒(MuV)在生精细胞中复制的影响

6．自噬抑制剂3MA及病毒对细胞活性的影响

讨论

小结

参考文献

文献综述 自噬与睾丸中的抗病毒反应

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