小G蛋白ARL8A和ARL8B作为抗肿瘤靶点的可行性研究

摘要

ARL8A(全称ADP-ribosylation factor like protein8A;又称为ARL10C或Gie2)和ARL8B（全称ADP-ribosylation factor like protein8B;又称为ARL10B或Gie1）是控制溶酶体迁移来调控细胞自噬水平的小G蛋白，二者的氨基酸序列相似度为91％，同属于Gie亚家族。在人体及其他高等动物的全身各器官内ARL8A和ARL8B都有表达。在肿瘤细胞内存在ARL8A和ARL8B都表达的情况，如Hela细胞;也存在ARL8B单表达的情况，如前列腺癌PPC1细胞。体外和体内实验证明，在ARL8B单独表达前列腺癌细胞内，抑制ARL8B的表达能明显抑制肿瘤的生长，证明ARL8B是一个抗前列腺癌药物的作用靶标。根据已有的研究成果，我们设想ARL8A单表达的肿瘤细胞是可能存在的。迄今为止，尚无单独针对ARL8A结构与功能的研究论文发表。寻找ARL8A单独表达的肿瘤细胞为研究ARL8A的功能提供重要的支撑。本项研究以寻找ARL8A优势表达的肿瘤细胞为前提，进而研究ARL8A的功能，确定ARL8A作为抗肿瘤药物作用靶标的可行性。 本论文第一章报道应用qRT-PCR法检测了一些肿瘤细胞内ARL8A和ARL8B的mRNA相对含量的结果，首次发现了ARL8A单独表达的神经母细胞瘤株SH-SY5Y和ARL8B单独表达的胃癌细胞株MGC-803。第二章报道了针对ARL8A单独表达的神经母细胞瘤株SH-SY5Y，实施ARL8A过表达和利用RNA干扰法下调ARL8A的表达量导致的细胞活力的变化及机理的研究结果。第三章报道了针对胃癌细胞株MGC-803，实施RNA干扰法下调ARL8B表达导致的促进细胞凋亡及作用机制的研究结果。 本研究结果证实设想的ARL8A单独表达细胞株是真实存在的，即SH-SY5Y细胞内仅表达ARL8A，同时还确证了MGC-803细胞株仅表达ARL8B。对ARL8A单独表达的SH-SY5Y细胞或ARL8B单独表达的MGC-803细胞，敲除ARL8A或ARL8B能导致细胞自噬水平提升，细胞出现明显的死亡率。而对于ARL8A和ARL8B都表达的细胞，仅降低其中之一的表达不会导致明显的细胞死亡。因此，ARL8A可以作为一个潜在的抗神经母细胞瘤药物作用靶标，而ARL8B还可以作为一个潜在的抗原发性胃低分化黏液样腺癌的药物作用靶标。

目录

声明

中英文缩略词表

摘要

文献综述

1肿瘤与肿瘤治疗简介

2小G蛋白ARL8A和ARL8B的结构和功能的研究现状

3本研究的目的及意义

第一章肿瘤细胞内ARL8A和ARL8B的相对表达量分析

1材料与试剂

2实验方法

3结果与讨论

第二章ARL8A作为抗神经母细胞瘤靶标的可行性验证

第一节ARL8A基因过表达

1．1材料与试剂

1．2实验方法

1．3结果

第二节应用shRNA下调ARL8A基因的表达

2．1材料与试剂

2．2实验方法

2．3结果

第三节ARL8A下调对裸鼠异位移植人神经母细胞瘤增殖的影响

3．1材料与试剂

3．2实验方法

3．3结果

讨论

第三章ARL8B是抗原发性胃低分化黏液样腺癌药物作用靶标的可行性验证

1材料与试剂

2方法

3结果

4讨论

结论

参考文献

附录

致谢

作者简介