白蜡及白蜡高级烷醇对脂溢模型小鼠脱发的作用研究

摘要

脂溢性脱发是当今三大脱发之一，多发生于男性，且随着压力和饮食结构的改变，脂溢性脱发越来越偏向于年轻化，给年轻人的自尊带来了很大的伤害。目前国际上公认的用于治疗雄激素性脱发的药物主要为米诺地尔和非那雄胺。但是这两种药物具有明显的副作用。寻找安全性好、对脱发生物活性高的药物成为当今研究的热点。白蜡是半翅目Hemiptera蚧总科Coccoidea白蜡蚧属Ericerus的白蜡虫雄性幼虫分泌的次生代谢物质。在中国民间白蜡常用作生发剂。但是对于白蜡治疗脱发的类型及其作用机理还未见报道。白蜡高级烷醇是采用氢化铝锂或还原法从白蜡中提取得到的一元饱和醇的混合物。研究表明高级烷醇具有广泛的药理活性，但是其对脱发治疗效果方面的研究鲜有报道。为了明确白蜡及白蜡高级烷醇治疗脱发的类型和作用机理，本论文从动物和细胞两个层面研究白蜡及白蜡高级烷醇对脂溢性脱发的作用效果及机理。动物方面以KM小鼠为研究对象探讨白蜡及白蜡高级烷醇对小鼠毛发外观、毛囊形态、小鼠血液中激素水平、小鼠皮肤内生长因子表达量的影响;细胞方面以人真皮乳头细胞为研究对象探讨白蜡及白蜡高级烷醇对人真皮乳头细胞的增殖作用以及对蛋白表达量的调节作用。主要的研究结果显示: (1)白蜡及白蜡高级烷醇对小鼠毛发外观和毛囊形态变化的影响。 模式组和溶剂对照组小鼠背部毛发脱落明显并散布有斑秃块，毛色发暗，毛囊长度缩短，毛囊微型化。而在模式小鼠背部涂抹白蜡及白蜡高级烷醇后小鼠背毛顺滑有光泽，背部脱毛不明显，相同面积范围内小鼠毛发重量明显高于模式组和溶液组。此外白蜡及白蜡高级烷醇能明显促进毛囊长度、毛球直径、生长期(A)/休止期(T)比值以及毛囊密度的增加。其中10％白蜡和1％白蜡高级烷醇促进毛囊生长的活性高于非那雄胺。 (2)白蜡及白蜡高级烷醇对激素的调节作用 给药期间，白蜡及白蜡高级烷醇对小鼠体内雌二醇的含量没有调节作用。而对睾酮含量和睾酮与雌二醇(TE/E2)比例的调节作用随着给药时间的延长而发生变化。其中给药第28d，白蜡及白蜡高级烷醇能明显降低小鼠血液中睾酮的含量和TE/E2比例，调整紊乱的激素水平。给药第60d，给药组和模式组小鼠血液中TE/E2比值与CK组之间差异不显著，小鼠激素水平趋于正常。然而2％白蜡高级烷醇组小鼠血液中睾酮的含量明显低于模式组。体外研究发现白蜡及白蜡高级烷醇能够降低睾酮转换为二氢睾酮的量，抑制5α-还原酶的活性，其对5α-还原酶的抑制中浓度高于2％非那雄胺。 (3)白蜡及白蜡高级烷醇对生长因子表达量的调节作用 与模式组相比，白蜡及白蜡高级烷醇能明显提高小鼠皮肤内血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)和碱性磷酸酶的表达量。其中，白蜡及白蜡高级烷醇促进小鼠皮肤内VEGF和EGF表达量的作用与剂量无关。其中白蜡及白蜡高级烷醇对VEGF的作用效果与5％米诺地尔差异不显著，白蜡与白蜡高级烷醇之间小鼠皮肤内的VEGF的表达量差异不显著。虽然不同浓度白蜡之间或者不同浓度白蜡高级烷醇之间EGF的表达量差异不显著。但是，在白蜡组中10％白蜡组小鼠皮肤内EGF的表达量最低，在白蜡高级烷醇组中1％白蜡高级烷醇组小鼠皮肤内的EGF表达量最高。其中1％白蜡高级烷醇组小鼠皮肤内EGF的表达量明显高于10％白蜡组和5％米诺地尔组，而10％白蜡组小鼠皮肤内EGF的表达量与5％米诺地尔组差异不显著。小鼠皮肤内碱性磷酸酶的活性随着给药时间发生改变。其中10％白蜡组和1％白蜡高级烷醇组小鼠皮肤内碱性磷酸酶的含量变化趋势与5％米诺地尔组相似。5％白蜡组和2％白蜡高级烷醇小鼠皮肤内碱性磷酸酶的含量在试验第28d到45d出现平台期，随后小鼠皮肤内碱性磷酸酶含量降低。 (4)白蜡及白蜡高级烷醇对细胞生长的影响 吐温80能够增加白蜡及白蜡高级烷醇在水中的溶解度，其最佳制备条件为吐温80∶白蜡=50∶1或吐温80∶白蜡高级烷醇=5∶1，溶液pH3～4，加热温度为91℃，搅拌时间30min。吐温80用量在1.25～6.25μg/mL范围内对人真皮乳头细胞没有伤害，细胞能够安全生长。在吐温80安全用量范围内白蜡及白蜡高级烷醇能促进健康细胞和模式细胞的增殖，并且能抑制TGF-β、caspase3、caspase8和caspase9蛋白的表达。其中，白蜡用量为1.25μg/mL，白蜡高级烷醇用量为12.5μg/mL时人真皮乳头细胞的增值率最高。白蜡及白领高级烷醇对TGF-β2蛋白的调节作用差异不明显，但是这两个物质对caspase蛋白的调节作用差异比较明显。白蜡对caspase9的调节作用较强，白蜡高级烷醇对caspase3和caspase8的调节作用较强。 综上所述，白蜡及白蜡高级烷醇能促进脂溢性脱发模式小鼠毛发的生长。其作用的靶标位点为毛球、5-α还原酶、二氢睾酮与受体的结合三个部位。白蜡及白蜡高级烷醇促进毛囊生长的作用机理为延长毛囊的生长期和阻止激素对毛囊的伤害两个方面。其中延长毛囊的生长期主要与促进血管内皮生长因子和表皮生长因子的表达以及促进真皮乳头细胞的增殖有关。阻止激素对毛囊伤害方面的机理主要表现为降低小鼠体内睾酮的含量，抑制5α-还原酶的活性，阻止二氢睾酮与雄激素受体的结合，并且能抑制caspase细胞凋亡信号通路。其中白蜡抑制内源性细胞凋亡信号通路，白蜡高级烷醇抑制外源性新版信号通路。

目录

声明

摘要

第一章绪论

1．1．1研究背景

1．1．2脂溢性脱发的研究进展

1．1．3白蜡及高级烷醇国内外研究现状及评述

1．2研究的目标和主要研究内容

1．2．1关键的科学问题与研究目标

1．2．2主要研究内容

1．3研究技术路线

第二章白蜡及白蜡高级烷醇毛囊组织学调查

2．1材料与方法

2．1．1．供试药剂

2．1．2试验仪器

2．1．3试验动物

2．1．4药剂配置

2．1．5溶剂致敏性试验

2．1．6模式动物的建立及实验处理

2．1．7外观调查

2．1．8组织学调查

2．1．9数据处理

2．2结果与分析

2．2．1有机溶剂致敏性

2．2．2外观调查和毛发重量

2．2．3毛囊形态变化

2．2．4毛囊组织学调查

2．3讨论

2．4小结

第三章白蜡及白蜡高级烷醇对激素的调节作用

3．1材料与方法

3．1．1供试药剂和仪器设备

3．1．2试验动物

3．1．3药剂配置

3．1．4动物分组、模型的建立及组织样品的制备

3．1．5血液中睾酮的含量测定

3．1．6血液中雌二醇的含量测定

3．1．7白蜡及白蜡高级烷醇对5α-还原酶的抑制作用

3．1．8数据处理

3．2结果与分析

3．2．1睾酮的含量

3．2．2雌二醇的含量

3．2．3睾酮与雌二醇的比值(TE／E2)

3．2．4白蜡及白蜡高级烷醇对5α-还原酶的抑制作用

3．3讨论

3．4小结

第四章白蜡及白蜡高级烷醇对生长因子的表达量

4．1材料与方法

4．1．1供试药剂及仪器设备

4．1．2试验动物

4．1．3药剂配置

4．1．4动物分组及模型的建立

4．1．5生长因子含量测定

4．1．6碱性磷酸酶含量测定

4．1．7数据处理

4．2结果与分析

4．2．1生长因子表达量

4．2．2碱性磷酸酶活性

4．3讨论

4．4小结

第五章白蜡及白蜡高级烷醇对人真皮乳头细胞的作用

5．1材料与方法

5．1．1供试药剂

5．1．2试验仪器

5．1．3试验细胞

5．1．4药剂配置

5．1．5白蜡及白蜡高级烷醇水溶液的制备

5．1．6吐温80对人真皮乳头细胞的安全性评价

5．1．7白蜡及白蜡高级烷醇促进细胞增殖的作用

5．1．8蛋白印记

5．1．9统计分析

5．2结果与分析

5．2．1不同pH值对水溶液稳定性的影响

5．2．2搅拌时间对水溶液稳定性的影响

5．2．3吐温80用量对水溶液稳定性的影响

5．2．4吐温80对人真皮乳头细胞的安全性评价

5．2．5白蜡及白蜡高级烷醇促进人真皮乳头细胞的增殖

5．2．6白蜡及白蜡高级烷醇对凋亡信号通路的调节

5．3讨论

5．3．1白蜡及白蜡高级烷醇水溶液的制备

5．3．2吐温80对人真皮乳头细胞的安全性

5．3．3白蜡及白蜡高级烷醇促进健康人真皮乳头细胞的增殖

5．3．4白蜡及白蜡高级烷醇促进模式细胞的增殖

5．3．5白蜡及白蜡高级烷醇对凋亡信号通路的调节

5．4小结

6．1结论

6．1．1白蜡及白蜡高级烷醇对毛囊形态的影响

6．1．2白蜡及白蜡高级烷醇对小鼠激素水平的调节作用

6．1．3白蜡及白蜡高级烷醇对生长因子的作用

6．1．4白蜡及白蜡高级烷醇对人真皮乳头细胞的作用

6．2创新点

6．3讨论

6．3．1白蜡及白蜡高级烷醇促进毛囊生长的作用

6．3．2白蜡及白蜡高级烷醇延长毛囊的生长期

6．3．3白蜡及白蜡高级烷醇阻止激素对毛囊的伤害

6．4展望

6．5存在的问题

参考文献

在读期间的学术研究

致谢