卷柏中穗花杉双黄酮的提取和分离纯化研究

摘要

穗花杉双黄酮是卷柏中的一种有效成分。它具有细胞毒和抗肿瘤、抗病毒、抑菌抗炎、抗氧化和舒张血管等多种药理活性，在化妆品、保健品和医药领域有着广阔的前景。本文确定了卷柏中穗花杉双黄酮的最佳提取条件；建立了初步纯化提取物的两步沉淀工艺；采用了制备型高效液相色谱、硅胶柱层析和低压柱层析对粗品进行了分离纯化。
　　 1、研究了穗花杉双黄酮的高效液相色谱分析方法，该分析方法分离效果好、简便快捷、节省溶剂，是一种快速准确检测穗花杉双黄酮的方法。确定反相高效液相色谱条件为：色谱柱为反相C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm，DiamodsilTM)，检测波长为337 nm，流动相甲醇∶0.1％TFA，采用梯度洗脱模式，柱温30℃，流速1.0 mL/min，进样量10μL。样品回收率为98.4％，精密度RSD=0.94％。
　　 2、确立了卷柏中穗花杉双黄酮的最佳提取条件，其工艺参数为：提取溶剂为80％乙醇，回流提取，料液比1:12(g/mL)，提取两次，提取温度75℃，提取时间0.5 h。所得穗花杉双黄酮粗品的纯度为5.92％，提取率为93.24％。
　　 3、建立了卷柏提取物的两步沉淀工艺，初步纯化粗提物。卷柏粗提物的纯度为5.92％，经两步沉淀工艺初步纯化后，其纯度可达58.19％，回收率为88.66％。与传统工艺相比，该方法简便、成本低廉且未使用额外的有机溶剂。
　　 4、采用制备型高效液相色谱分离纯化穗花杉双黄酮粗品，其色谱条件为：流动相甲醇∶0.1％TFA(65∶35，v/v)，流速10 mL/min，检测波长为337nm，柱温为常温。经制备型高效液相色谱分离精制后产品纯度可达99.2％，回收率可达94.7％。
　　 5、研究了硅胶柱层析分离纯化穗花杉双黄酮粗品条件。以CHCl3∶MeOH体系洗脱，所得产品纯度可达97.16％，回收率可达50.74％。
　　 6、建立了以Hexane∶EtOH洗脱体系低压柱层析纯化穗花杉双黄酮粗品的方法。比较了等度洗脱和梯度洗脱方式。梯度洗脱模式下，当上样量为100 mg时，所得产品纯度为98.7％，回收率可达87.8％，且目标产物的收集时间仅为11 min，溶剂耗费也显著降低。
　　 7、采用高效液相色谱、质谱和核磁共振对穗花杉双黄酮产品进行了结构鉴定，验证了实验结果。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 文献综述

1.1前言

1.2卷柏的化学成分

1.3卷柏中黄酮类化合物简介

1.4穗花杉双黄酮的结构和性质

1.5穗花杉双黄酮的功能

1.5.1细胞毒活性和抗肿瘤作用

1.5.2抗病毒作用

1.5.3抑菌抗炎作用

1.5.4抗氧化作用

1.5.5舒张血管作用

1.6穗花杉双黄酮的分析测定方法

1.6.1薄层层析法

1.6.2高效液相色谱法

1.7黄酮类化合物的提取分离方法

1.7.1提取方法

1.7.2分离方法

1.8本文采用的穗花杉双黄酮分离纯化方法

1.8.1硅胶柱层析法

1.8.2制备型高效液相色谱法

1.8.3低压柱层析法

1.9本实验研究的目的、内容和意义

1.9.1目前存在的问题

1.9.2研究的目的和意义

1.9.3研究的内容

第二章 卷柏中穗花杉双黄酮的含量测定

2.1引言

2.2实验材料与仪器

2.2.1实验材料

2.2.2实验仪器

2.3实验方法

2.3.1卷柏样品的制备

2.3.2对照品溶液的制备

2.3.3穗花杉双黄酮检测方法的建立

2.3.4样品分析方法

2.3.5样品含量测定

2.4结果与分析

2.4.1穗花杉双黄酮检测方法的建立

2.4.2样品含量测定

2.5小结

第三章 卷柏中穗花杉双黄酮的提取工艺优化

3.1引言

3.2实验材料与仪器

3.2.1实验材料

3.2.2实验仪器

3.3实验方法

3.3.1提取方法的选择

3.3.2提取溶剂的筛选

3.3.3提取次数的确定

3.3.4单因素实验

3.3.5正交实验设计

3.4结果与分析

3.4.1提取方法的选择

3.4.2提取溶剂的筛选

3.4.3提取次数的确定

3.4.4单因素实验

3.4.5正交设计实验

3.5小结

第四章 卷柏中穗花杉双黄酮的分离纯化

4.1引言

4.2实验材料与仪器

4.2.1实验材料

4.2.2实验仪器

4.3实验方法

4.3.1两步沉淀工艺

4.3.2制备型高效液相色谱

4.3.3硅胶柱层析

4.3.4低压柱层析

4.4结果与分析

4.4.1两步沉淀工艺

4.4.2制备型高效液相色谱

4.4.3硅胶柱层析

4.4.4低压柱层析

4.5小结

第五章 卷柏中穗花杉双黄酮的结构鉴定

5.1引言

5.2实验材料和仪器

5.2.1实验材料

5.2.2实验仪器

5.3实验方法

5.3.1高效液相色谱

5.3.2质谱

5.3.3核磁共振

5.4结果与分析

5.4.1高效液相色谱

5.4.2质谱

5.4.3核磁共振

5.5小结

第六章 结论与展望

参考文献

致谢

研究成果和发表的学术论文

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