微流体免疫技术在动物源性食品安全检测中的应用研究

摘要

最近几年，我国的食品安全问题愈发突出，解决这个问题越来越受到大众的关注。而要减少食品安全问题的发生就得加大食品安全检测的力度，这就要求更加灵敏、便携的检测技术，微流体免疫技术作为一种新兴的食品安全检测方法逐渐走进科研人员的视野。
　　本文通过微流体免疫技术在动物源性食品安全检测中的应用研究，得出微流体免疫技术用于食品安全检测的灵敏度高，试剂消耗量少等优点，并且利于实现现场检测。在实验中选择了出现食品安全问题比较突出的瘦肉精作为检测对象，分别对涉及瘦肉精类的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇三种物质进行了一系列检测实验，其中利用微流体免疫技术方法对盐酸克伦特罗进行了分析检测，得出其检测限低于0.1ng·ml-1;利用微流体免疫-化学发光的技术对莱克多巴胺进行了分析检测，根据抑制率为10％作为检测限的判定标准得出其在缓冲液中的理论检测限为0.35ng·ml-1，通过测定7组空白尿液组得出尿液中的检测限为0.97ng·ml-1，具有良好的回收率;利用酶联免疫的方法对沙丁胺醇进行了分析，得出其检测限为25.19ng·ml-1，可见微流体免疫技术在食品安全检测中的应用可以提高检测灵敏度，检测过程方便利于现场分析，而且具有很好的可操作性。同时在实验的前期，也对聚苯乙烯羧基微球表面固定蛋白质进行了包被过程中相关条件的探究和定量分析，其中实验选择聚苯乙烯羧基微球与牛血清白蛋白(BSA)进行共价偶联实验，得出当其他条件不变时，在400μg至1200μg范围内当初始加入BSA量为800μg时，则BSA的包被率最高;混匀反应时间为1h是本实验的最佳选择;羧基聚苯乙烯微球共价连接BSA蛋白实验中，选择EDAC作为催化剂。利用探究的最佳的条件测定相应的盐酸克伦特罗抗体(CLB-IgG)、牛血清白蛋白偶联的盐酸克伦特罗半抗原(CLB-BSA)、牛血清白蛋白偶联的沙丁胺醇半抗原(SAL-BSA)所得出的羧基聚苯乙烯包被率分别为21.68％、11.5％、32.2％。

目录

声明

摘要

符号说明

第一章 绪论

1．1 食品安全问题概述

1．2 我国食品安全问题频繁发生的主要原因

1．3 解决我国食品安全问题的重要措施

1．4 食品安全分析中常见的检测技术

1．4．1 气相色谱(GC)技术

1．4．2 高效液相色谱(HPLC)技术

1．4．3 质谱技术(MS)

1．4．4 酶联免疫技术(ELISA)

1．4．5 PCR技术

1．4．6 生物芯片技术

1．5 本文研究的内容

第二章 羧基聚苯乙烯微球包被蛋白的定量分析

2．1 引言

2．2 实验材料与方法

2．2．1 主要实验材料

2．2．2 主要实验仪器

2．2．3 实验原理

2．2．4 相关公式

2．2．5 实验步骤

2．3 结果与分析

2．3．1 微球溶液成像状态分析

2．3．2 微球固定BSA的图谱分析

2．3．3 一个微球固定的BSA量

2．3．4 最初添加的蛋白量对微球固定蛋白的影响

2．3．5 反应时间对微球固定蛋白的影响

2．3．6 偶联剂对微球包被蛋白率的影响

2．3．7 聚苯乙烯微球所包被的抗原抗体量

2．4 本章小结

第三章 微流体免疫技术应用于动物源性食品中盐酸克伦特罗的分析检测

3．1 引言

3．2 实验材料与方法

3．2．1 主要实验材料与仪器

3．2．2 实验方法

3．3 结果分析

3．3．1 微球包被BSA偶联的盐酸克伦特罗半抗原

3．3．2 盐酸克伦特罗抗体稀释比例

3．3．3 辣根过氧化酶标记的鼠抗体的稀释比例

3．3．4 盐酸克伦特罗抗体和辣根过氧化酶标记的鼠抗体的进样体积配比

3．3．5 微流体免疫抑制率实验分析

3．3．6 盐酸克伦特罗标准曲线及其检测限

3．3．7 盐酸克伦特罗抗体特异性实验

3．4 本章小结

第四章 微流体免疫-化学发光技术应用于猪尿样品中莱克多巴胺的分析检测

4．1 引言

4．2 实验材料与方法

4．2．1 主要实验材料与仪器

4．2．2 实验方法

4．3 结果与分析

4．3．1 微流体免疫-化学发光系统检测可行性评估

4．3．2 微球表面包被BSA偶联的莱克多巴胺半抗原的确证分析

4．3．3 莱克多巴胺抗体的稀释比例

4．3．4 底物流速

4．3．5 不同体积的兔抗体对底物的影响

4．3．6 莱克多巴胺标准曲线的绘制及其检测限的判定

4．3．7 猪尿样品中莱克多巴胺的标准曲线的绘制

4．3．8 猪尿样品中莱克多巴胺检测限和回收率的测定

4．4 本章小结

第五章 微流体免疫技术评估

5．1 酶联免疫分析沙丁胺醇的研究

5．1．1 主要实验材料与仪器

5．1．2 实验方法

5．1．3 结果与分析

5．2 讨论

5．3 本章小结

第六章 结论

参考文献

致谢

研究成果及发表的学术论文

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