三种蒿属花粉诱发小鼠变应性鼻炎致敏性的比较

摘要

目的：　　通过用我国常见的三种气传蒿属花粉提取物免疫小鼠，建立变应性鼻炎模型，检测小鼠体内各种免疫指标，研究三种花粉的致敏特点，为后续研究三种蒿属花粉诱发的变应性鼻炎精准诊断、治疗及疗效评价提供基础研究的相关数据。　　方法：　　1.三种花粉黄花蒿、艾蒿、大籽蒿均购于杭州艾乐吉生物科技有限公司，提取花粉提取液，并分离所需的两种过敏蛋白组分Artv1和Artv3及其同源物。　　2.购买32只BALB/c雌性小鼠随机分为4组，分别为黄花蒿花粉致敏组、艾蒿花粉致敏组、大籽蒿花粉致敏组、空白对照组，每组花粉致敏组小鼠每次每只注射0.1mg对应蒿属花粉提取液，空白对照组小鼠注射对照液，第0、7、14、21天注射4次，第21天完成腹腔注射后，半小时后用致敏阶段所用浓度花粉提取液连续滴鼻激发，每次滴鼻100ul，连续激发14天。　　3.记录小鼠鼻部症状行为学评分；光镜下观察小鼠鼻粘膜的病理性改变；利用ELISA双抗体夹心法检测小鼠血清中总IgE(tIgE)水平的比较，每种花粉提取液对应的特异性IgE(sIgE)水平的比较，蒿属花粉主要致敏组分Artv1和Artv3及其同源物对应的sIgE水平的比较，利用ELISA试剂盒检测血清和鼻腔灌洗液中细胞因子白介素-4、白介素-5的含量的对比；以探究三种蒿属花粉诱发小鼠变应性鼻炎的能力以及免疫反应的差别。　　结果：　　1．观察过程中记录到小鼠有打喷嚏和挠鼻症状，有少量鼻涕流出。观察记录到三组花粉致敏组小鼠鼻部症状行为学评分均＞5分，均造模成功，空白组小鼠鼻部症状行为学评分均＜5分，三组花粉致敏组小鼠鼻部症状行为学评分均高于空白对照组（P＜0.05）；三组花粉致敏组小鼠组间两两相互比较，小鼠鼻部症状相对应评分无差异（P＞0.05）。　　2．鼻黏膜HE染色显示：空白对照组小鼠鼻黏膜上皮结构完整，纤毛排列均匀，黏膜下层血管无充血，无明显炎性细胞散落；三组花粉致敏组小鼠鼻黏膜有不同程度损坏，黄蒿花花粉致敏组小鼠鼻黏膜上皮结构紊乱断裂，充斥大量炎性细胞；艾蒿花粉致敏组小鼠鼻黏膜上皮结构排列紊乱，有中等量炎性细胞浸润；大籽蒿花粉致敏组小鼠鼻黏膜上皮结构不连续，有少量炎性细胞浸润。　　3．通过ELISA检测小鼠血清可知：三组花粉致敏组小鼠血清中总IgE（tIgE)水平均高于对照组（P＜0.05）；分别两两比较三组花粉致敏组小鼠血清中tIgE水平，黄花蒿花粉致敏组中tIgE水平最高，大籽蒿花粉致敏组tIgE水平最低，艾蒿花粉致敏组tIgE水平居中（P＜0.05）。　　4．通过ELISA检测小鼠血清可知：三组花粉致敏组小鼠血清中蒿属花粉提取液对应的特异性IgE（sIgE)水平均高于对照组（P＜0.05）；分别两两比较三种蒿属花粉致敏组小鼠血清中对应蒿属花粉提取液sIgE水平，黄花蒿花粉致敏组中sIgE水平最高，大籽蒿花粉致敏组sIgE水平最低，艾蒿花粉致敏组sIgE水平居中（P＜0.05）。　　5．通过ELISA检测小鼠血清可知:三组花粉致敏组小鼠血清中三种蒿属花粉中重要变应原组分Artv1和Artv3及其同源物对应的特异性IgE（sIgE）水平均高于空白对照组（P＜0.05）；比较三组花粉致敏组中Artv1及其同源物对应的sIgE水平，黄花蒿花粉致敏组最高，大籽蒿花粉致敏组最低，艾蒿花粉致敏组居中（P＜0.05）；三组花粉致敏组中Artv3及其同源物对应的sIgE水平比较，从高到低依次为艾蒿花粉致敏组、黄花蒿花粉致敏组、大籽蒿花粉致敏组（P＜0.05）。　　6．通过ELISA检测小鼠血清可知：三组花粉致敏组小鼠血清中IL-4和IL-5的含量均高于空白对照组（P＜0.05）；三种花粉致敏组小鼠血清中IL-4的含量最多的为大籽蒿花粉致敏组，其次为黄花蒿花粉致敏组，含量最少的为艾蒿花粉致敏组（P＜0.05）；三组花粉致敏组小鼠血清中IL-5的含量最高为黄花蒿花粉致敏组，其次为艾蒿花粉致敏组，最低为大籽蒿花粉致敏组（P＜0.05）。　　7．通过ELISA检测小鼠鼻腔灌洗液可知：三组花粉致敏组小鼠鼻腔灌洗液中IL-4和IL-5的浓度均高于空白对照组（P＜0.05）；三组花粉致敏组小鼠鼻腔灌洗液中IL-4含量最多的为大籽蒿花粉致敏组，其次为黄花蒿花粉致敏组，最少的为艾蒿花粉致敏组（P＜0.05）；三种花粉致敏组小鼠鼻腔灌洗液中IL-5含量从高到低依次为：黄花蒿花粉致敏组、艾蒿花粉致敏组、大籽蒿花粉致敏组（P＜0.05）。　　结论：　　1、黄花蒿花粉致敏组小鼠鼻部症状行为学评分最高，小鼠鼻黏膜组织病理学表现出的炎症损伤最重，小鼠血清中产生的tIgE含量最高，小鼠血清中蒿花粉提取液对应的sIgE含量最高，小鼠血清中蒿属花粉变应原重要组分Artan1对应的sIgE水平最高。　　2、艾蒿花粉致敏组小鼠血清中蒿属花粉变应原组分Artar3对应的sIgE水平最高。　　3、大籽蒿花粉致敏组小鼠血清及鼻腔灌洗液中IL-4含量最高。　　4、黄花蒿花粉致敏组小鼠血清及鼻腔灌洗液中IL-5含量最高。

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