克氏原螯虾抗脂多糖因子PcALF5及两种溶菌酶PcLysi4和PcLysi5参与免疫反应的机制研究

目录

声明

1 前言

1.1 问题的由来

1.2 无脊椎动物免疫系统

1.3 抗菌肽参与多种免疫反应

1.3.1 抗菌肽的抗细菌功能

1.3.2 抗菌肽的抗真菌功能

1.3.3 抗菌肽的抗病毒功能

1.3.4 抗菌肽的抗癌功能

1.4 抗菌肽的抗菌机制的研究进展

1.4.1 导致细菌的细胞膜裂解

1.4.2 抑制细菌细胞壁的合成

1.4.3 抑制蛋白酶活性

1.4.4 影响细菌蛋白的正确折叠

1.4.5 影响核酸的生物合成与代谢

1.4.6 抑制蛋白质的合成

1.5 本研究的目的，结果以及意义

2 抗脂多糖因子5 在克氏原螯虾体内抗细菌免疫反应的分子机制研究

2.1 引言

2.2 材料方法

2.2.1 菌株，载体，试剂和仪器

2.2.2 组织分布和表达模式实验

2.2.3 重组蛋白的表达以及纯化

2.2.4 细菌结合实验

2.2.5 细菌清除实验

2.2.6 PcALF5 的体外抑菌实验

2.2.7 存活率实验

2.2.8 Far-western blot 实验与质谱分析

2.2.9 Pulldown实验

2.2.10 蛋白合成抑制实验

2.2.11 PcALF5 对核糖体蛋白基因转录的检测

2.2.12 数据统计与分析

2.3 结果

2.3.1 PcALF5 的组织分布

2.3.2 PcALF5 在弧菌刺激后的表达模式

2.3.3 PcALF5 的重组表达与蛋白纯化

2.3.4 PcALF5 能够与细菌结合

2.3.5 PcALF5 提高克氏原螯虾对细菌的清除能力

2.3.6 克氏原螯虾的存活率的统计

2.3.7 PcALF5 在体外具有抗细菌能力

2.3.8 两种大肠杆菌的蛋白能够与 PcALF5 结合

2.3.9 质谱鉴定结果

2.3.10 PcALF5 能够与30S 核糖体蛋白S4(RPS4)结合

2.3.11 PcALF5 能过于大肠杆菌的离子膜通道蛋白(MscL)结合

2.3.12 PcALF5 抑制由IPTG 所诱导的蛋白质的合成

2.3.13 PcALF5 使大肠杆菌核糖体蛋白基因的转录

2.4 讨论

3 两个高度同源的溶菌酶的鉴定与功能分析

3.1 引言

3.2 材料方法

3.2.1 实验仪器，菌株，载体以及试剂

3.2.2 生物信息学分析

3.2.3 PcLysi4和 PcLysi5 mRNA的组织分布与表达模式

3.2.4 重组蛋白的表达与纯化

3.2.5 细菌清除实验

3.2.6 细菌结合实验

3.2.7 存活率实验

3.2.8 体外抗菌实验

3.2.9 Western blot分析实验

3.2.10 Pull down 实验

3.3 结果

3.3.1 PcLysi4和 PcLysi5的生物信息学的分析

3.3.2 组织分布与表达模式实验

3.3.3 PcLysi4和 PcLysi5参与抗菌免疫反应

3.3.4 PcLysi4和 PcLysi5在体外具有抗菌活性

3.3.5 PcLysi5抑制病毒的复制

3.3.6 PcLysi5与 WSSV的囊膜蛋白 VP24 结合

3.4 讨论

总结和创新点

参考文献

简介

致谢