抗特发性肺纤维化(IPF)中药活性物质体外筛选模型建立及罗勒多糖抗IPF的实验研究

目录

声明

摘要

引言

第一部分建立IPF体外模型—TGF-β1诱导A549细胞

一、实验技术路线

二、实验材料

(一)细胞株

(二)试剂

(三)主要仪器

三、实验方法

(一)试剂的配制

(二)细胞培养

(三)MTT法测不同剂量TGF-β1在48h对A549细胞活力的影响

(四)观察不同剂量TGF-β1对A549形态学变化的影响

(五)RT-qPCR检测不同剂量TGF-β1诱导A549上皮间质转化标志基因(marker)以及Col Ⅰ表达的变化

四、统计学分析

五、实验结果

(三)TGF-β1对A549细胞Col Ⅰ、E-cadherin、Vimentin mRNA的表达水平影响

六、小结

一、实验技术路线

二、实验材料

(一)细胞株

(二)样品与试剂

(三)主要仪器

三、实验方法

(一)样品液的制备

(二)活性物质的筛选

四、统计学分析

五、实验结果

(一)药物的最大无毒剂量

(二)抗IPF的药物

六、小结

第三部分罗勒多糖抗IPF的作用及作用机制

(二)样品与试剂

(三)主要仪器

三、实验方法

(一)样品液的制备

(二)罗勒多糖对细胞形态学变化的影响

(三)罗勒多糖对Col Ⅰ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA基因表达的影响

(五)罗勒多糖对TGF-β1诱导的A549羟脯氨酸含量的影响

(六)侵袭实验检测细胞对人工基底膜的降解能力

(七)细胞运动实验检测细胞运动能力

(八)细胞划痕实验检测细胞运动能力

四、统计学分析

五、实验结果

(一)罗勒多糖对细胞形态学的影响

(三)罗勒多糖对Col Ⅰ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达的影响

(四)罗勒多糖对A549细胞羟脯氨酸含量影响

(五)细胞侵袭实验结果

(六)细胞运动实验结果

(七)细胞划痕实验结果

六、小结

讨论

一、IPF的研究进展

二、IPF体外模型-TGF-β1诱导A549细胞的建立

三、中药活性物质的筛选

四、罗勒多糖抗IPF的作用及机制

结语

参考文献

附录

致谢

著作