论文说明
声明
摘要
英文缩略表
第一章引言
1．1弓形虫与弓形虫病简述
1．1．1弓形虫的病原特点
1．1．2弓形虫病的传播与危害
1．2CRISPR-Cas9介导弓形虫的基因编辑
1．2．1CRISPR-Cas9系统组成
1．2．2CRISPR-Cas9系统的应用
1．2．3电转技术
1．2．4弓形虫基因筛选标签
1．3弓形虫分泌蛋白研究进展
1．3．2弓形虫棒状体蛋白
1．3．3弓形虫致密颗粒蛋白
1．4研究目的与意义
第二章弓形虫TGGT1-210370蛋白的分析与定位
2．1材’料
2．1．1虫株及细胞
2．1．2主要试剂与仪器设备
2．1．3主要溶液的配制
2．2实验方法
2．2．3DH5α感受态细胞的制备
2．2．4sgRNA的设计
2．2．5目的基因的扩增
2．2．6目的质粒的转化与阳性质粒的确定
2．2．7蛋白定位同源臂的扩增
2．2．8弓形虫Pru虫株的收集与纯化
2．2．9敲除株的构建与筛选
2．2．10间接免疫荧光
2．3实验结果
2．3．1TGGT1-210370蛋白二级结构分析
2．3．2目的质粒的构建
2．3．3同源臂片段的构建
2．3．4添加Myc标签虫株的鉴定
2．3．5间接免疫荧光实验
2．4小结与讨论
第三章弓形虫TGGT1-210370基因缺失株的构建
3．1材料
3．1．1虫株及细胞
3．1．2主要试剂与仪器设备
3．1．3主要溶液的配制
3．2实验方法
3．2．1sgRNA的设计
3．2．2目的基因的扩增
3．2．3目的质粒的转化与阳性质粒的确定
3．2．4抗性片段的扩增
3．2．6弓形虫Pru虫株的收集与纯化
3．2．7敲除株的构建与筛选
3．3实验结果
3．3．1目的质粒的构建
3．3．2抗性片段的扩增
3．3．3敲除虫株的初次鉴定与单克隆鉴定
3．4小结与讨论
第四章弓形虫敲除虫株Pru△210370表型分析
4．1材料
4．1．1虫株及细胞
4．1．2主要试剂与仪器设备
4．1．3主要溶液的配制
4．2实验方法
4．2．1噬斑实验
4．2．2入侵实验
4．2．3缓殖子诱导转化实验
4．2．5小鼠脑包囊检测实验
4．3实验结果
4．3．1噬斑实验
4．3．2入侵实验
4．3．3缓殖子诱导转换实验
4．3．5小鼠脑包囊检测实验
4．4小结与讨论
参考文献
全文总结
作者简介
致谢
扬州大学;
