烟草多酚氧化酶的分离纯化，光谱性质，反应机理和应用研究

摘要

多酚氧化酶是从真菌到哺乳动物广泛存在的一类铜蛋白,它们的共同特征是能通过分子氧氧化多酚到醌.烟草中的多酚氧化酶在烟草的烘烤过程中起相当大的作用,它可使多酚类物质氧化并生成与烟叶颜色和香味有关的物质.烟草多酚氧化酶同时在植物的抗病虫害方面有重要的作用.所以烟草多酚氧化酶对烟草行业来说是非常重要的一类蛋白酶.由于烟草中色素的干扰,烟草多酚氧化酶系统的分离纯化至今没有报道过.我们首次从烟草中系统地分离纯化了烟草中的多酚氧化酶,得到它们两种纯的同工酶,分别被命名为PPO Ⅰ和PPO Ⅱ.该文对他们的分离纯化,生化性质,酶学性质,催化反应机理和潜在应用等方面进行了系统的研究.

目录

文摘

英文文摘

第一章多酚氧化酶的研究概况和进展

1.1多酚氧化酶概述

1.2多酚氧化酶的分离纯化及活性研究

1.3多酚氧化酶在植物生理中的作用

1.4己知多酚氧化酶的结构

1.5多酚氧化酶的催化反应机理

1.6烟草中的多酚氧化酶研究概况

参考文献

第二章多酚氧化酶的分离纯化

2.1实验部分

2.1.1仪器与材料

2.1.2 PPO Ⅰ与PPO Ⅱ的分离纯化方法

2.2结果和讨论

2.2.1多酚氧化酶的分离和纯化

2.3本章小结

参考文献

第三章烟草多酚氧化酶PPO Ⅰ和PPO Ⅱ的理化和酶学性质

3.1实验部分

3.1.1仪器和材料

3.1.2实验方法

3.2结果和讨论

3.2.1分子量的测定

3.2.2米氏常数的测定

3.2.3 pH值对活性的影响

3.2.4温度对PPOs活性的影响

3.2.5底物选择性

3.2.6多酚氧化酶的光谱性质

3.3本章小节

参考文献

第四章多酚氧化酶的催化氧化机理的探讨

4.1实验部分

4.1.1仪器和材料

4.1.2实验方法

4.2结果和讨论

4.2.1实验结果

4.2.2讨论

4.3本章结论

参考文献

第五章叠氮和PPO Ⅱ的作用

5.1实验部分

5.1.1仪器和材料

5.1.2实验方法

5.2结果和讨论

5.2.1实验结果

5.2.2讨论

参考文献

第六章十二烷基硫酸钠对烟草多酚氧化酶的活性影响

6.1材料和方法

6.1.1粗酶液的提取，柱色谱分离，米氏常数和酶活性的测定

6.1.2 PAGE电泳

6.1.3温度、pH值和SDS对其活性的影响实验

6.2结果与讨论

6.2.1 SDS对活性的影响

6.2.2米氏常数的测定

6.2.3 pH值对PPO活性的影响

6.2.4温度对PPO Ⅰ和PPOⅡ的活性的影响

6.2.5结论

参考文献

第七章 在不同的pH条件下PPO Ⅱ的二级结构分析和活性中心的变化

7.1材料和方法

7.1.1材料

7.1.2实验方法

7.2结果和讨论

7.2.1 FT-IR谱

7.2.2 CD谱分析

7.2.3 pH对PPO Ⅱ活性中心的影响的探讨

7.3本章小结

参考文献

第八章PPO Ⅱ在Nafion介质中的电化学

8.1材料和方法

8.1.1仪器和材料

8.1.2实验方法

8.2结果和讨论

8.2.1 PPO Ⅱ在玻碳电极上的直接的电化学

8.2.2 PPO Ⅱ电化学性质的可能的应用

8.2.3 pH，盐度和温度对PPO Ⅱ生物传感器的影响

8.2.3 PPO Ⅱ/Nafion膜电极的时间稳定性

8.3本章结论

参考文献

本文总结

攻读博士期间的论文

致谢