hVps29p的结构和功能以及14-3-3θ、CH锌指、DNAJC8和GLP的克隆、表达、纯化、鉴定和结晶学研究

摘要

本文对hVps29p的结构和功能进行了研究。文章从人大脑文库中克隆了hVps29基因的全长序列，酶切位点为NdeI和XhoI。构建了hVps29的表达质粒hVps29p-pET22b，并在E.coli[BL21(DE3)]获得了高表达的可溶蛋白。分子筛和动态光散射实验证实hVps29p在溶液中主要以单体存在，为此推测hVps29p的单体是一种稳定且行使功能的单位。hVps29p在溶液中可以结合金属离子，特别是对Fe3+和Ni2+的结合能力较强。文章同时提出，Galectin在细胞内有多种功能，目前已经发现它们可作为调控子参与细胞间的粘附、信号传导作用并与多种肿瘤疾病相关。AF161508是一个新近发现的基因，目前还没有结构和功能的报道，其表达产物暂命名为Galectin-likeprotein(GLP)。本文克隆、表达、纯化GLP，并用气象扩散法获得了该蛋白的晶体。应用转膜及N端氨基酸序列测定表明它的23-LSSP和31-VYFE容易发生降解。

目录

文摘

英文文摘

致谢

第一篇综述 囊泡与蛋白质的转运和分拣

参考文献

第二篇hVps29p的结构和功能研究

第一章Vps29p及“retromer complex”的研究进展

第二章、实验结果与讨论——hVps29p的结构和功能关系的研究

第一节hVps29p的克隆、表达、纯化及基本生化性质的鉴定

第二节hVps29p的初步晶体学研究

第三节hVps29p的晶体结构解析

第四节hVps29p的模型质量分析

第五节hVps29p的总体结构

第六节hVps29p的类似结构

第七节金属离子结合位点和可能的活性位点

第八节hVps29p可能的蛋白质-蛋白相互作用位点

第九节hVps29p与hVps35p及其它蛋白间的相互作用

第十节小结

第三章、实验材料和方法

第一节基因克隆及表达质粒构建

第二节hVps29p的表达和纯化

第三节hVps29p的生化性质鉴定及多克隆抗体的制备

第四节hVps29p的晶体生长和衍射数据收集

第五节hVps29p的相位获取、模型构建和结构修正

参考文献

第三篇14-3-3θ的克隆、表达、纯化和初步晶体学研究

第一章综述——14-3-3蛋白的研究进展

第二章实验结果与讨论

第一节14-3-3θ的一级序列分析

第二节14-3-3θ的克隆、表达和纯化

第三节14-3-3θ的初步晶体学研究

第四节小结

第三章实验材料和方法

第一节14-3-3θ的表达质粒构建

第二节14-3-3θ的表达和纯化

第三节14-3-3θ的生化性质鉴定

第四节14-3-3θ的晶体生长及衍射数据收集

参考文献

第四篇人造血干/祖细胞结构基因组学研究

第一章C2H2锌指蛋白的表达、纯化、鉴定和晶体生长

第一节C2H2锌指蛋白

第二节结果与讨论

第三节实验材料和方法

参考文献

第二章DNAJC8的克隆、表达、纯化、鉴定和结晶学研究

第一节热休克蛋白和DNAJ

第二节结果与讨论

第三节实验材料和方法

参考文献

第二章Galectin-like protein(GLP)的克隆、表达、纯化和晶体生长

第一节Galectin的研究进展

结果与讨论

实验材料和方法

参考文献

实验小结

附录一试剂和溶液

附录二发表论文