植物基因功能分析高通量双元载体

摘要

Invitrogen公司利用λ噬菌体点特性重组系统建立的GatewayTM重组克隆技术极大的方便了目的基因的高通量的克隆。目的基因首先穿梭到入门载体中,然后根据各种模式生物研究的需要重组到的各种目的载体中去。由于其高通量的高效克隆的特点,许多实验室构建了很多可以用来研究启动子分析,蛋白质定位,蛋白与蛋白相互作用,组成型以及可诱导性表达。为了满足高等植物功能基因研究的需要,我们构建了一系列高通量的可以用米进行农杆菌介导植物转化的双元载体。这些载体不仅具有高通量的特点,同时通过引入特异的多克隆位点,可以非常方便的进行启动子的替换。因此这系列载体能够根据研究的需要实现目的基因的组成型、组织特异性及诱导性等可调控化表达,启动子的分析,也可以通过GFP融合实现对蛋白质亚细胞定位的研究以及实现目的基因的组成型、组织特异性及诱导性RNAi敲除。
　　本文首先介绍了植物转基因所使用的双元载体相关内容,同时介绍了目前所发展的采用GatewayTM重组克隆技术建立起来的植物双元载体、功能以及相关的参考文献,并详细介绍我们构建的双元载体的使用情况,包括功能、使用方法和使用注意事项。

目录

Abstract

摘要

第一章 背景综述

1.1 农杆菌介导的植物转基因载体

1.1.1 早期的双元载体

1.1.2 双元载体的研究进展

1.2 Gateway~(TM)重组克隆技术的原理及优点

1.2.1 Gateway~(TM)重组克隆技术的原理

1.2.2 重组克隆的实现

1.2.3 Gateway~(TM)技术的优点

1.3 整合 Gateway~(TM)重组克隆技术的双元载体

1.4 研究的意义

第二章 材料和方法

2.1 大肠杆菌菌株，质粒，DNA操作和克隆

2.2 载体构建

2.2.1 基础载体pCB2003的构建

2.2.2 双元表达载体的构建

2.2.3 基因沉默载体

2.2.4 GFP融合载体

2.2.5 启动子分析载体

第三章 结果和讨论

3.1 高通量基础双元载体pCB2003的构建

3.2 单子叶和双子叶植物双元表达载体

3.3 基因沉默载体

3.4 GFP融合表达载体

3.5 启动子分析载体

第四章 结论和展望

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文