帕金森病模型大鼠黑质自噬的表达和药物干预研究

摘要

目的:　　观察帕金森病（Parkinson's disease, PD）模型大鼠黑质自噬的表达和咪多吡药物干预对其表达的影响，探讨自噬在PD发病中的作用及咪多吡治疗帕金森病的作用机制。　　方法:　　1.健康雄性SD大鼠90只按随机数字法分为正常对照组（对照组）、帕金森病模型组（模型组）和咪多吡治疗组（咪多吡组），每组又分为模型制备后4d、8d两个亚组，每个亚组各15只大鼠，其中，6只用于免疫组化染色，6只用于Western blotting法检测，3只用于透射电镜观察。　　2.采用颈背部皮下注射鱼藤酮制作PD模型。　　3.模型制备成功后给予咪多吡（0.5mg/kg）灌胃，分别连续给药4d和8d。　　4.透射电镜观察黑质自噬体的形成；免疫组化和Western blotting法检测黑质Beclin1和LC3的表达水平。　　5.组织切片采用OLYMPUS显微镜（400×）摄像，应用Motic Med6.0数码医学图像分析系统进行分析，Western blotting结果用Image J分析。　　6.数据采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量资料用均数±标准差（x?s）表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05认为有统计学意义。　　结果:　　1.透射电镜下，对照组大鼠黑质中神经元细胞核型规则，核膜完整，染色质分布均匀，胞质内细胞器丰富，结构基本正常，未见到自噬体。模型组4d时，神经元细胞中出现自噬体，呈圆形，多位于细胞核旁，溶酶体数量增多。8d时，自噬体、溶酶体数量显著增多。咪多吡组神经元细胞损伤较模型组减轻，可见到正常的细胞器，依然可见肿胀线粒体及粗面内质网，4d时，可见自噬小体，但较模型组明显减少。8d时，未见到自噬体。　　2.与对照组相比较，模型组大鼠黑质中Beclin1、LC3蛋白表达和LC3II/LC3I比值增多（P<0.05），8d高于4d，有显著性差异（P<0.05）。与模型组相比较，咪多吡组黑质中 Beclin1、LC3蛋白表达和LC3II/LC3I比值降低（P<0.05），8d低于4d，有显著性差异（P<0.05）。　　结论:　　1.PD模型大鼠黑质中自噬被激活，自噬参与了PD的发生发展过程；　　2.咪多吡可能通过抑制PD模型大鼠黑质神经细胞自噬，发挥对帕金森病的治疗作用。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 主要药物和试剂

1.1.2 主要仪器和器材

1.1.3 实验动物及分组

1.1.4 动物模型制备及给药

1.1.5 电镜观察

1.1.6 免疫组化检测方法

1.1.7 免疫印迹检测方法

1.1.8 统计学分析

1.2 结果

1.2.1 各组大鼠黑质电镜观察结果

1.2.2 各组大鼠黑质Beclin1、LC3免疫组化结果

1.2.3 各组大鼠黑质Beclin1、LC3 II/LC3I免疫印迹检测结果

1.3 讨论

1.3.1 帕金森病动物模型的制备

1.3.2 自噬及其观察结果

1.3.3 各组大鼠黑质Beclin1和LC3的表达变化

1.3.4 咪多吡对PD模型大鼠的作用

1.4 结论

参考文献

第2章 综 述关于自噬与帕金森病的研究

2.1 自噬概述

2.2 自噬的发生过程

2.3 自噬的分子机制

2.3.1 自噬发生的分子机制

2.3.2 自噬的调控机制

2.4 自噬的双重功能

2.4.1 自噬的保护作用

2.4.2 自噬与细胞的死亡

2. 5 自噬的检测

2.5.1 透射电子显微镜下超微结构的观察

2.5.2 自噬相关蛋白的检测

2. 6 自噬与帕金森病

2.6.1 α-突触核蛋白与自噬

2.6.2 PINK1与自噬

2.6.3 DJ-1与自噬

参考文献

致谢

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