低浓度紫杉醇对大鼠肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响及机制研究

摘要

目的：肺动脉高压(PAH)的病理学特点是肺血管重构，肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的结构及功能异常是肺血管重构的中心环节。近年发现肺血管重构中PASMCs表现出异常增殖的类肿瘤现象。为探索抗肿瘤药物对于PAH的治疗前景，本课题研究低浓度紫杉醇(PTX)对大鼠PASMCs增殖、迁移、表型转换等生物学行为的影响及其机制，为探索新的PAH治疗药物提供实验基础及理论依据。　　方法：1、使用SD大鼠肺动脉组织块贴壁培养原代PASMCs，采用细胞形态学观察法、细胞免疫组织化学法及免疫荧光染色平滑肌细胞标志基因α-SMA鉴定PASMCs;2、实验分别设立对照组(control组)、诱导组(PDGF-BB组)、实验组(PDGF-BB+PTX组);对照组：正常培养的PASMCs;诱导组：利用PDGF-BB诱导的PASMCs增殖、迁移、表型转换;实验组：利用低浓度（非细胞毒浓度）的紫杉醇干预PDGF-BB诱导的PASMCs;3、CCK-8法检测各组细胞增殖能力;4、流式细胞术检测各组细胞周期、凋亡;5、划痕实验法观察各组细胞迁移能力;6、RT-qPCR及Western Blot分别检测各组细胞表型转化标志基因α-SMA及SM22α的mRNA水平及蛋白水平的表达;7、免疫荧光法观察各组细胞骨架微丝F-actin及微管α-tubulin、β-tubulin的构象。　　结果：1、贴壁培养大鼠肺动脉组织块,培养第4-6d细胞逐渐丛组织块边缘萌出，经传代自然纯化后，细胞呈长梭形，细胞融合成片后呈现“波峰波谷样”排列，免疫组织化学及免疫荧光鉴定均显示PASMCs纯度满意，α-SMA阳性细胞率达95％以上，适用于研究PASMCs增殖、迁移及表型转换等细胞生物学行为;2、与对照组比较，PDGF-BB组PASMCs增殖与迁移能力明显增强，并且α-SMA及SM22α的mRNA及蛋白表达下调，差异均具有统计学意义(P＜0.05);与PDGF-BB组相比，低浓度紫杉醇组PASMCs增殖与迁移能力明显降低，并且α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达上调，差异均具有统计学意义(P＜0.05);3、与PDGF-BB组比较，紫杉醇组细胞周期G2/M期细胞率明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05);对照组、PDGF-BB组及低浓度紫杉醇组三组之间细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);4、与对照组比较，PDGF-BB组细胞骨架荧光强度明显减弱，F-actin排列紊乱、边缘不规则、呈毛刺样，α-tubulin，β-tubulin形态模糊;与PDGF-BB组比较，紫杉醇组细胞骨架荧光强度上调，F-actin平行于细胞长轴，排列较为规则，α-tubulin与β-tubulin构象清晰;三组PASMCs的微管细胞骨架α-tubulin与β-tubulin均表现为共定位。　　结论：1、低浓度紫杉醇促使PASMCs表型转换为收缩型细胞，抑制细胞增殖，减慢细胞迁移;低浓度紫杉醇阻滞PASMCs细胞周期进程于G2/M期，但不诱导细胞凋亡;2、低浓度紫杉醇影响PASMCs生物学行为的过程中细胞骨架微丝、微管均发生了构象变化，细胞骨架可能是药物作用点;3、低浓度紫杉醇影响PASMCs生物学行为改变这一现象，对于逆转肺血管重构具有重要意义。紫杉醇对于PAH有较好的应用前景，值得深入研究。

目录

摘要

前言

第一部分 低浓度紫杉醇对肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响

前言

材料与方法

结果

附图

讨论

结论

第二部分 低浓度紫杉醇影响肺动脉平滑肌细胞生物学行为的机制研究

材料与方法

结果

附图

讨论

结论

全文总结

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

紫杉醇在非肿瘤性疾病中应用的研究进展 综述

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