血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证患者的circRNA临床相关机制研究

摘要

冠心病因其高发病率和高死亡率已经成为严重的临床和公共卫生问题，稳定型心绞痛是其重要分型之一。中医称冠心病为“胸痹”“心痛”，认为气机阻滞、血脉闭塞是其重要病机，气滞血瘀证是其常见中医证型，血府逐瘀汤是气滞血瘀证的代表方剂。虽然目前临床针对冠心病，已有规范化的中西医结合治疗及二级预防，但仍存在着阿司匹林和氯吡格雷抵抗、介入术后焦虑恐惧、冠脉再狭窄等问题，中医药治疗冠心病历史悠久，疗效确切。单纯的使用西医指标或量表，不能充分反映中医药疗效，PRO量表作为疗效评价的方法之一，可以从患者治疗前后病情变化的主观感受出发来评价中医药疗效。circRNA作为近年来研究的热点，不仅参与冠心病的发病进程，还在冠心病的诊断、治疗、预后等方面发挥着重要的作用，团队前期在circRNA领域也已有一些实践探索。因此依托于中医药行业科研专项“证候类中药新药疗效评价方法研究”，基于气滞血瘀证中医PRO量表评价血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的有效性，并结合团队前期在circRNA领域的相关研究，对血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的circRNA相关机制进行探讨。　　目的：1、基于气滞血瘀证中医PRO量表评价血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的有效性;　　2、研究血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的circRNA相关机制。　　方法：第一部分基于气滞血瘀证中医PRO量表的血府逐瘀胶囊干预稳定塾心绞痛气滞血瘀证的巢氏病例对照研究　　采用回顾性巢氏病例对照研究设计，依据相关纳、排标准纳入来自北京地区三家医院的稳定型心绞痛气滞血瘀证患者24例，其中试验组与对照组分别12例。采集一般情况信息后，采用中国中医科学院的网络版中央随机系统，按1∶1比例随机产生试验组与对照组。试验组给予血府逐瘀胶囊治疗，对照组给予血府逐瘀胶囊模拟剂治疗，均为6粒/次，2次/天，温开水送服，导入期1周，疗程7周。入组当天、2、4、6、7周分别记录受试者的气滞血瘀证中医PRO量表(主要结局指标)、入组当天、7周记录患者的中医症状体征量表(次要结局指标)、心绞痛发作次数与持续时间(疗效性指标)和体温，心率，呼吸频率，血压等基本生命体征、血常规、尿常规、便常规、肝肾功能、凝血功能、心电图等指标(安全性指标)，并全程记录不良事件。数据录入使用Epidata3.0，数据分析使用SPSS25.0，对计量资料进行正态性检验，符合正态分布的计量资料用平均值4-标准偏差(Mean+SD)表示，组内治疗前后各参数的比较采用配对t检验，试验组和对照组两组间各参数的比较采用独立样本t检验，计数资料用例数与百分比表示，采用费希尔精确检验(T＜1或n＜40)，所有的统计检验均采用双侧检验，可信区间采用95％的可信度，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.005，料料P＜0.0001判定差异具有统计学意义，作图使用Graph Pad Prism6.0。　　第二部分血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的circRNA相关机制研究　　筛选第一部分血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的试验组患者5例与对照组患者5例;结合文献检索与团队前期科研成果，筛选目标circRNA;采集一般情况信息后，于入组次日和出组次日分别抽取这10例患者的清晨空腹状态下静脉血4ml，完成白细胞的分离，提取总RNA，使用琼脂糖凝胶电泳和NanoDrop2000分光光度计完成RNA质检后，通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)，验证这4个circRNA在第一部分治疗前后的变化，进行基因GO功能富集、基因KEGG信号通路分析、miRNA预测，构建circRNA-miRNA.mRNA网络，对PCR结果进行分析与讨论。数据统计分析采用SPSS25.0，组内治疗前后各参数的比较采用配对t检验，两组间各参数的比较采用独立样本t检验，所有的统计检验均采用双侧检验，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.005，****P＜0.0001判定差异具有统计学意义，作图使用Graph Pad Prism6.0。　　结果：第一部分基于气滞血瘀证中医PRO量表的血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的巢氏病例对照研究　　1、试验组和对照组治疗前基线比较均无明显差异(P＞0.05)，具有可比性;　　2、主要结局指标：PRO量表积分提示，治疗2、4、6、7周后，试验组的总有效率高于对照组，治疗7周后试验组气滞血瘀证候改善优于对照组(P=0.027)，差异具有统计学意义;3、次要结局指标：试验组的胸闷(P=0.023)、心慌(P=0.028)和善太息(P=0.041)改善明显优于对照组，差异具有统计学意义;4、疗效性指标：试验组的心绞痛发作次数(P=0.006)和持续时间(P=0.001)改善明显优于对照组，差异具有统计学意义;5、安全性指标：治疗前后试验组和对照组的体温、心率、呼吸、血压等基本生命指征和尿常规、便常规、心电图均未出现异常，血常规、肝肾功能、凝血四项变化无明显统计学差异(P＞0.05)，治疗及随访期间各受试者均未反生不良事件。　　第二部分血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的circRNA相关机制研究　　1、试验组和对照组治疗前基线比较均无明显差异(P＞0.05)，具有可比性;2、筛选hsa circ-0029589、circ-Lrp6、circ-ARF3、hsa_circ_0036007为本次实验的目标circRNA;3、血液样本质量检测结果显示：RNA完整度、总量、纯度等质量均满足实验要求，评级为A级，可开展后续实验;4、hsa_circ_0029589和hsa_circ0036007熔解曲线均为单一峰，PCR扩增特异性较好;5、对hsa_circ_0029589和hsa_circ_0036007的相对表达量进行对照组治疗前和试验组治疗前的组间比较(P=0.2046、P=0.0873)、对照组治疗前和对照组治疗后的组内比较(P=0.4517、P=0.7539)、对照组治疗后与试验组治疗后的组间比较比较(P=0.6476、P=0.1821)，均没有统计学差异;hsa_circ_0029589在试验组治疗前和试验组治疗后组内比较(P=0.0782)，没有统计学差异;hsa_circ_0036007试验组治疗前和试验组治疗后的组内比较(P=0.0006)，试验组治疗后hsa_circ_0036007的表达量约是治疗前的0.304倍，hsa_circ_0036007发生了显著下调。　　结论：1、气滞血瘀证中医PRO量表可作为稳定型心绞痛气滞血瘀证的临床疗效评价指标，血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证有较好的有效性与安全性;　　2、hsa_circ_0036007可能是预测血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证疗效的潜在生物标志物，并可能通过与hsa-let-7d-5p、hsa-let-7a-5p、hsa-miR-93-5p或PI3K-Akt信号通路关联来发挥作用，下一步的研究中可扩大样本量或增加动物模型细胞株的相关实验进行验证。

目录

声明

摘要

符号说明

文献综述

综述一 冠心病气滞血瘀证的临床相关研究进展

1冠心病的中医病因病机

2气滞血瘀证是冠心病常见证型

3血府逐瘀汤是气滞血瘀证的代表方剂

4 PRO量表在冠心病方面的相关研究

综述二 circRNA与冠心病

1 circRNA的生物学功能

2 circKNA在冠心病诊断中的应用

3 circRNA在冠心病治疗中的应用

4circRNA在冠心病预后中的应用

5展望

前言

第一部分基于气滞血瘀证中医PRO量表的血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的巢氏病例对照研究

研究对象

研究设计

研究结果

讨论

结论

第二部分 血府逐瘀胶囊干预稳定型心绞痛气滞血瘀证的circRNA相关机制研究

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

附录

致谢

个人简历