毛竹Mariner-like转座子的转座特性分析

摘要

转座子(transposon,Tn),又叫转座因子(transposable element, TEs)、跳跃因子、可移动基因、跳跃基因,是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位,实质是在细胞中能从同一条染色体上的一个位点“跳”到另一个位点,或者从一条染色体转移到另一条染色体上的DNA序列。　　本研究将之前分离得到的两个具有完整转座酶结构的毛竹 MLE转座子 Phmar1和Phmar2和与之对应的非自主的转座子Phmar1NA和Phmar2NA构建到带有绿色荧光蛋白基因的植物表达载体pBIN m-gfp5-ER上,然后通过农杆菌介导法对野生型拟南芥进行遗传转化。再对T1代植株进行筛选和鉴定。利用荧光观察和PCR扩增的方法,在确定的转基因植株中发现含有毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2的转基因植株出现了转座现象,而含有非自主转座子Phmar1NA和Phmar2NA的转基因植株则没有。结果表明了毛竹MLE转座子Phmar1和Phmar2是具有转活性的,并且可以在模式植物拟南芥中发生异源转座。　　再对转基因植株中Phmar1和Phmar2转座子的转座足迹和插入位点进行分析,发现两种转座子都会在转座过程中留下转座足迹,并且会转座到拟南芥基因组的其他位置。再用生物信息学软件对转座足迹序列进行分析,发现Phmar1和Phmar2转座子的剪切过程是不同,从而可以判断这两个转座子的转座特性不同。　　本研究是首次将竹亚科MLE转座子在拟南芥中进行异源转座,并成功分析了转座特性,为下一步构建高活性毛竹MLE转座子以及开发植物MLE转座子标签系统奠定了基础。

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第1章 文献综述

1.1前言

1.2转座子的概述

1.3 Mariner-like转座子

1.4 转座子的应用

1.5 本研究的目的与意义

1.6 本研究的策略

1.7 技术路线

第2章 MLE转座子载体的构建与转化拟南芥

2.1 实验材料

2.2 试验方法

2.3 结果与分析

第3章 MLE转座子转座特性的分析

3.1 实验材料

3.2 试验方法

3.3 结果与分析

第4章 结论与讨论

4.1 Phmar1和Phmar2可以在拟南芥中发生异源转座

4.2 Phmar1和Phmar2转座子的切割特性不同

4.3 绿色荧光载体可以有效地用来检测转座行为

第5章 展望

参考文献

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致谢