声明
摘要
主要符号对照表
第一章引言
1．1蛋白质N端甲基化修饰
1．1．1N端甲基化修饰的生物学功能
1．1．2N端修饰的动态变化
1．2．1NRMT1催化底物的研究
1．2．2NRMT1的结构特点
1．2．3NRMT1在功能调控中的作用
1．3着丝粒与着丝粒蛋白CENPs
1．3．1着丝粒的组成和功能
1．3．2着丝粒蛋白CENPs
1．3．3CENPs的生物学功能
1．4CENP-B蛋白
1．4．1CENP-B的功能
1．4．2OENP-B氨基端甲基化的研究
1．5本文的研究目的和意义
第二章实验材料与方法
2．1概述
2．2实验仪器与材料
2．2．1表达体系、菌株及载体
2．2．2仪器
2．2．3实验试剂
2．2．4常用缓冲液
2．3实验方法
2．3．1表达载体的构建
2．3．2目的蛋白的表达与纯化
2．3．3蛋白晶体生长与优化
2．3．4晶体衍射数据的收集及结构解析
2．3．5圆二色谱
2．3．6基于荧光的热漂移技术TSA实验
2．3．8MALDI-TOF-MS测定酶活
第三章NRMT1蛋白的表达纯化、结晶和结构解析
3．1．2NRBT1蛋白纯化
3．2NRMT1蛋白和CNAP-B的复合物结晶
3．2．1 NRMT1和CENP-B(1-9)G1me1多肽以及SAH晶体生长
3．2．2NRMT1和CENP-B(1-9)G1me2多肽以及SAH晶体生长
3．3复合物晶体结构解析
3．4甲基化构象分析
3．5本章小结
第四章NRMT1催化CENP-B的分子机制
4．1．1整体结构分析
4．1．2底物识别机制
4．2NRNT1与底物的互作
4．2．2 ITC测定NRMT1对不同甲基化多肽的结合
4．2．3 ITC测定CENP-B对NRMT1和SAH／SFG的结合
4．3NRMT1酶活实验
4．4NRMT1突变体的研究
4．4．1突变体的二级结构测定
4．4．2酶活测定
4．4．3突变体与多肽的结合
4．5小结
第五章工作总结与展望
5．1工作总结
5．2展望
5．2．1CENP-A和CENP-B以及CENP-C复合物的研究
5．2．2N端甲基化的功能研究
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
山东大学;
