CMS--D2育性恢复基因Rf1候选基因筛选与功能分析

目录

声明

摘要

符号说明

1绪论

1．1三系杂交棉恢复系的重要性

1．2恢复基因的研究进展

1．2．1植物中细胞质雄性不育恢复基因的研究进展

1．2．2棉花细胞质雄性不育恢复基因研究

1．3基因测序技术的发展与应用

1．3．1基因测序技术的发展

1．3．2基因测序在植物体研究中的应用

1．4病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing，VIGS)

1．4．1VIGS的原理

1．4．2VIGS技术在棉花基因功能研究中的应用及优势

1．5研究目的与意义

2三代全长转录组测序分析

2．1试验材料

2．2试验方法

2．2．1材料处理

2．2．2全长转录组测序

2．2．3Illumina RNA测序

2．2．4PacBio全长转录组数据联合Illumina RNA-Seq数据分析

2．2．5实时荧光定量PCR(qRT-PCR)

2．3结果与分析

2．3．1全长转录组测序分析

2．3．2PacBio全长转录组数据联合Illumina RNA-Seq数据分析

2．4讨论

3候选基因克隆及功能分析

3．1材料

3．1．1植物材料

3．1．2载体和菌株

3．1．3实验试剂和仪器

3．2试验方法

3．2．1候选基因全长转录本克隆及序列分析

3．2．2候选基因沉默片段克隆

3．2．3检测PCR产物序列

3．2．4目的片段与pCLCrVA载体重组连接

3．2．5转化根瘤杆菌

3．2．6转基因阳性株鉴定

3．2．7基因表达模式分析

3．2．8花粉活力测定

3．3结果与分析

3．3．1基因序列分析

3．3．2VIGS阳性株鉴定

3．3．3目的基因表达水平分析

3．3．4花药育性观察和花粉活力测定

3．4讨论

4全文总结

附录

参考文献

作者简介

致谢