组蛋白去甲基化酶KDM5A维持小鼠胚胎干细胞稳定性的研究

目录

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摘要

中英文缩略词表

1前言

2材料和方法

2．1实验材料

2．1．1菌株与质粒

2．1．2细胞系

2．1．3主要试剂

2．1．4主要仪器设备

2．1．5主要试剂的配制

2．2实验方法

2．2．1 小鼠原代胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast，MEF)的分离培养

2．2．2饲养层细胞(feeder)的制备

2．2．3小鼠胚胎干细胞(E14TG2a)的培养

2．2．4E14TG2a细胞自发分化

2．2．5KDM5A敲低质粒的构建

2．2．6E14TG2a细胞Lipo转染

2．2．7细胞核蛋白的提取

2．2．8Bradford法测定蛋白浓度

2．2．9蛋白质免疫印迹(Western Blotting)

2．2．10克隆形成实验

2．2．11碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase，AP)染色

2．2．13Trizol法提取细胞中的RNA

2．2．14Oligo dT引物反转录

2．2．15qRT-PCR(Ouantitative Real-time PCR)

2．2．16统计学分析

3结果

3．1KDM5A在mESCs中高表达并在mESCs自发分化过程中下调

3．2KDM5A在维持mESCs稳定性的过程中发挥重要作用

3．2．1KDM5A敲低与过表达质粒的表达鉴定

3．2．2KDM5A影响mESCs的形态

3．2．3KDM5A敲低，导致mESC向三胚层分化

3．2．4KDM5A影响mESCs的细胞周期

3．2．5KDM5A影响mESCs的克隆形成能力

3．3KDM5A和PcG蛋白的重要成员EZH2、Suz12存在相互作用

3．3．1生物信息学预测与KDM5A存在相互作用的蛋白

3．3．2mESCs自发分化过程中，EZH2与Suz12的表达

3．3．3KDM5A与PcG蛋白重要成员EZH2、Suz12存在相互作用

4讨论

5结论

参考文献

综述

参考文献

个人简历

致谢