MEBT/MEBO对大鼠难愈合创面中PTEN/AKT/VEGF信号系统表达的影响

摘要

目的：　　从PTEN/AKT/VEGF信号通路进一步探讨MEBT/MEBO促进大鼠难慢性难愈合创面修复的机制。　　方法：　　健康成年 SPF级 Wistar雄性大鼠90只，12周龄，体重220g～250g，适应性喂养1周后，随机分为：空白对照组18只、对照组（急性全层皮肤缺损组）18只、模型组54只。空白对照组大鼠不作任何有损伤处理；对照组大鼠在造模部位行全层皮肤切除，但不注射氢化可的松；模型组大鼠在造模部位行全层皮肤切除后注射氢化可的松制备慢性难愈合创面模型，然后按处理方法随机分为模型组、MEBO组和贝复济组，每组18只。各组创面制备后立即用药治疗。在造模后第3天、第7天、第14天每组各处死6只，取新鲜创面组织，立即放于液氮罐中，并在取材完毕后迅速转入﹣80℃超低温冰箱。待标本全部收集完成后进行Western Blotting、RT-PCR方法检测PTEN、p-AKT、VEGFR2因子的表达。　　结果：　　（1）PCR结果：①MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中 PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）；MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的PTEN表达量均有显著差异（P<0.05）；空白对照组大鼠三个时相点的PTEN表达量未有明显变化（P>0.05）。②MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中VEGFR2表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）；MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的VEGFR2表达量均有显著差异（P<0.05）；空白对照组大鼠由于未做有损伤处理，其组织乃正常皮肤，故VEGFR2表达量未有明显变化（P>0.05）。③MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中 p-AKT表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）；MEBO组、贝复济组和对照组各组三个时相点的p-AKT表达量均有显著差异（P<0.05）；空白对照组大鼠由于未做有损伤处理，其组织乃正常皮肤，故p-AKT表达量未有明显变化。（2）WB结果：①MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中PTEN表达量都呈现出降低-升高的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递减趋势（P<0.05）；MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的PTEN表达量均有显著差异（P<0.05）；空白对照组大鼠由于未做有损伤处理，其组织乃正常皮肤，故 PTEN表达量未有明显变化（P>0.05）。②MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中VEGFR2表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）；MEBO组、贝复济组、对照组和模型组各组三个时相点的VEGFR2表达量均有显著差异（P<0.05）；空白对照组大鼠由于未做有损伤处理，其组织乃正常皮肤，故VEGFR2表达量未有明显变化（P>0.05）。③MEBO组、贝复济组和对照组的大鼠随时间变化其创面肉芽组织中p-AKT表达量都呈现出升高-降低的趋势（P<0.05）；模型组则显示呈递增趋势（P<0.05）；MEBO组各组三个时相点的p-AKT表达量均有显著差异（P<0.05），空白对照组大鼠由于未做有损伤处理，其组织乃正常皮肤，故p-AKT表达量未有明显变化（P>0.05）。　　结论：　　（1）MEBO能促进大鼠慢性难愈合创面的愈合。（2）MEBO能降低慢性难愈合创面肉芽组织中PTEN蛋白、PTEN mRNA的表达水平。（3）MEBO能升高慢性难愈合创面肉芽组织中p-AKT蛋白、VEGFR2蛋白、p-AKT mRNA、VEGFR2 mRNA的表达水平。（4）MEBO可能通过下调PTEN，激活AKT信号通路，增加VEGFR2的表达来促进创面血管生成，从而加速创面愈合。

目录

声明

引言

第一部分 动物实验研究

1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验所需的仪器、药物、试剂

2 实验方法及步骤

2.1 动物模型的建立

2.2 实验动物分组及换药方式

2.3 实验取材

2.4 Western Blotting检测方法与指标测定

2.5 RT-PCR法检测方法与指标测定

2.6统计学处理

3 结果

3.1 各组大鼠创面组织中PTEN、VEGFR2、p-AKT mRNA的表达水平

3.2 各组大鼠创面组织中PTEN、VEGFR2、p-AKT蛋白的表达水平

第二部分 讨 论

1 传统医学对慢性难愈合创面的认识

1.1 慢性难愈合创面的中医病因病机

1.2 慢性难愈合创面的治疗原则

1.3 慢性难愈合创面的治疗进展

1.4 皮肤再生医疗技术（MEBT/MEBO）

2 慢性难愈合创面的西医研究

2.1 病因病机

2.2 西医治疗现状

3. PTEN/AKT/VEGF信号通路

3.1 PTEN

3.2 AKT

3.3 VEGF

4. MEBO通过PTEN/AKT/VEGF信号通路促进创面愈合

4.1 MEBO对大鼠难愈合创面PTEN表达的影响

4.2 MEBO对大鼠难愈合创面p-AKT表达的影响

4.3 MEBO对大鼠难愈合创面VEGFR2表达的影响

5 结语

6 存在的问题与展望

结论

参考文献

缩略词表

综述: 体表慢性难愈合创面的研究进展

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果