声明
第一章 前 言
1.1 微生物对环境的应答机制概述
1.2 双组份系统简介
1.2.1 TCS各组份结构与功能
1.2.2 TCS信号转导与反馈调控机制
1.3 微生物多重耐药性概述
1.4 抗生素耐受形成的主要分子机制
1.4.1 抗生素胞内浓度最小化
1.4.2 抗生素作用靶点突变
1.4.3 抗生素作用靶点修饰与保护
1.4.4 直接改变抗生素药物活性
1.5 TCS与多重耐药性
1.6 荧光假单胞菌研究进展
1.6.1 荧光假单胞菌概述
1.6.2 荧光假单胞菌与多重耐药性
1.7 微生物共适应性分析
1.8 本文立意
第二章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1菌株与质粒
2.1.2试剂与仪器
2.2 共适应性分析
2.3 基因缺失菌株的构建
2.4 D52A、D52E点突变菌株的构建
2.5 RstA及其突变体蛋白的表达载体构建及表达纯化
2.5.1 RstA、D52A、D52E蛋白表达载体构建
2.5.2 蛋白质的表达和纯化
2.6 蛋白质的体外磷酸化
2.7 凝胶阻滞实验
2.8 DNaseI足迹实验
2.9抗生素最小抑制浓度测定
2.10 细菌总RNA提取和荧光定量PCR
2.11 半乳糖苷酶报告载体的构建及酶活测定
2.12 蛋白质组学样品的制备和数据分析
2.13 蛋白质的化学交联
第三章 结果与讨论
3.1荧光假单胞菌中TCS RstA/RstB与多个外排泵存在共适应性
3.1.1 共适应性分析
3.1.2 荧光假单胞菌2P24中序列分析
3.2 RstA直接影响荧光假单胞菌2P24多重耐药性
3.3 RstA正向调控外排泵EmhABC及CmeAB的表达
3.3.1 RstA调节外排泵的表达
3.3.2 RstA蛋白质与外排泵基因上游调控区互作不显著
3.4 RstA发挥效应依赖于磷酸化
3.4.1 RstA蛋白质经磷酸化与外排泵基因上游调控区互作
3.4.2 RstA经磷酸化的功能激活依赖于D52
3.5 RstB不同结构域对荧光假单胞菌多重耐药性的影响
3.6 RstA以二聚体形式调节外排泵基因的表达
3.7 RstA作为一个全局性转录因子参与调控多个生物学过程
第四章 总结与展望
4.1 主要结论
4.2 研究意义与展望
参考文献
在学期间科研成果
附录
致谢
兰州大学;