电针耳穴对年龄相关性聋豚鼠蜗神经核线粒体自噬及葡萄糖代谢的影响

摘要

目的：探讨线粒体自噬及葡萄糖代谢在年龄相关性聋豚鼠蜗神经核老化进程中的作用，以及电针“听宫”穴与“翳风”穴对年龄相关性聋豚鼠蜗神经核线粒体自噬及葡萄糖代谢的影响。　　方法：1、选择40只豚鼠，其中包括健康4月龄豚鼠30只、18月龄自然老化豚鼠10只。30只4月龄豚鼠随机分三组：模型组、电针组、对照组，各组10只。模型组豚鼠连续颈背部皮下注射D-半乳糖6周（300mg/kg/d）；电针组豚鼠在与模型组同等处理基础上，每天予以电针“听宫”穴及“翳风”穴治疗，共持续6周；对照组豚鼠给以颈背部皮下注射等体积的0.9%氯化钠注射液。10只自然老化组豚鼠自然喂养。2、采用Micro PET/CT检测各组蜗神经核葡萄糖代谢情况。3、采用实时荧光定量PCR和Western blot技术研究各组豚鼠蜗神经核LC3和PINK1、PARK2的mRNA表达及PINK1、Parkin蛋白的表达变化。4、统计学方法：采用SPSS24.0进行数据统计，数据采用均值±标准差（(x)±s）表示，数据分析采用单因素方差分析，以P＜0.05为检验水准。　　结果：1、葡萄糖代谢变化：各组蜗神经核与小脑SUVmax平均比值间的差异有统计学意义（F=12.143,P=0.001）。模型组和自然老化组豚鼠蜗神经核与小脑SUVmax平均比值低于对照组（P＜0.05）；模型组与自然老化组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；电针组SUVmax平均比值高于模型组（P＜0.05）。2、PCR结果：各组豚鼠蜗神经核中PINK1、PARK2mRNA表达差异有统计学意义（FPINK1=21.614,P＜0.001;FPARK2=20.662,P＜0.001）。模型组和自然老化组中PINK1、PARK2mRNA表达高于对照组（P＜0.05）；模型组PINK1、PARK2mRNA表达高于自然老化组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；与模型组相比，电针组PINK1、PARK2mRNA表达降低（P＜0.05）。各组豚鼠蜗神经核中LC3mRNA的相对表达量有统计学差异（F=13.198,P＜0.001）。模型组和自然老化组的LC3mRNA表达均高于对照组（P＜0.05）；模型组的LC3mRNA表达高于自然老化组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；电针组的LC3mRNA表达低于模型组（P＜0.05）。3、Western blot结果：各组豚鼠蜗神经核中PINK1、Parkin蛋白相对灰度值比较差异有统计学意义（FPINK1=47.484,P＜0.001;FParkin=19.789,P＜0.001）。与对照组比较，模型组与自然老化组的PINK1、Parkin蛋白表达增加（P＜0.05）；模型组中PINK1、Parkin蛋白表达高于自然老化组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；电针组的PINK1、Parkin蛋白表达均低于模型组（P＜0.05）。　　结论：1、葡萄糖代谢水平降低可能促进年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的老化。2、PINK1/Parkin介导的线粒体自噬水平增高可能在老化进程的早期促进年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的重塑。3、电针“听宫”穴与“翳风”穴可能通过提高葡萄糖代谢水平，促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬水平恢复正常，延缓D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的老化进程。

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂

1.3 主要实验仪器

2 实验方法

2.1 建立模型

2.2 Micro PET/CT显像

2.4 PCR检测

2.5 Western Blot检测

3 统计学方法

结果

1 蜗神经核葡萄糖代谢情况比较

2 各组蜗神经核的PINK1、PARK2、LC3的mRNA表达情况

2.1 PINK1、PARK2的mRNA相对表达量

2.2 LC3的mRNA相对表达量

3 各组蜗神经核的PINK1、Parkin蛋白的表达情况

4 ABR 阈值

讨论

1、葡萄糖代谢水平降低促进年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的老化过程

2、PINK1/Parkin介导的线粒体自噬参与年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的老化过程

3、电针可通过调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬，提高葡萄糖代谢，延缓D-半乳糖致年龄相关性聋豚鼠蜗神经核的老化过程

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:PINK1/Parkin途径介导的线粒体自噬在药物性聋中的研究进展

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