甾体类芳香化酶抑制剂代谢产物的雄激素活性在乳腺癌治疗中的作用

摘要

目的:探究甾体类芳香化酶抑制剂在乳腺癌治疗中的作用机制,阐释非甾体类芳香化酶抑制剂耐药后换用甾体类芳香化酶抑制剂治疗有效的原因,寻找乳腺癌药物治疗新途径.　　方法:体外实验:通过台盼蓝染色鉴定细胞活性的方法,分析甾体类芳香化酶抑制剂(aromatase inactivators,AIs)福美司坦(Formestane,4-OHA)、依西美坦(Exemestane,EXE)及其17-羟基代谢产物4-羟基-睾酮(4-hydroxytestosterone,4-OHT)、17-羟基-依西美坦(17-hydroexemestane,17-HEXE)对MCF-7、ZR-75-1及MDA-MB-231乳腺癌细胞系增殖活性的影响.动物实验:通过雄性Wistar大鼠去势试验来比较不同浓度的福美司坦、依西美坦及其17-羟基代谢产物以及双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)的雄激素效应.用二羟甲基苯蒽(DMBA)诱导雌性Sprague Dawley大鼠产生乳腺癌.大鼠造模后经卵巢去势处理并随机分为DHT、4-OHT、17-HEXE实验组及安慰剂对照组,约定肿瘤体积与分组前初始肿瘤体积的比值为相对体积大小(relative volume),比较不同组SD大鼠肿瘤的相对体积大小及平均肿瘤数量.应用SPSS17.0软件分析系统对数据进行统计学处理,计量资料采用(x)±SEM,各组数据间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),计数资料描述其各类的例数及百分数,结果以p＜0.05为差异有统计学意义.　　结果:1.在MCF-7细胞系中,所有试验药物都对细胞的增殖起到了抑制作用,并且药物浓度越高,其抑制细胞增殖的作用越明显.其中,AIs的17-羟基代谢产物4-OHT、17-HEXE在任何浓度下对细胞增殖的抑制作用均分别强于相同浓度下它们的上游化合物4-OHA、EXE.在ZR-75-1细胞系中,细胞的增殖在高浓度的试剂作用下受到了明显的抑制,而4-OHT、17-HEXE同样发挥出相较于4-OHA、EXE更强的抑制细胞增殖的作用.在不表达雌激素受体(estrogen receptor,ER)及雄激素受体(androgen receptor,AR)的MDA-MB-231乳腺癌细胞系中,药物种类或浓度与抑制细胞增殖没有相关性.　　2.通过比较实验大鼠的前列腺、精囊、肛提肌的湿重发现,不同药物对去势Wistar大鼠的雄激素营养作用程度不同,且均表现出作用强度与药物剂量的正相关性,且当与雄激素受体拮抗剂氟他胺(flutamide,Flu)联用时,所有药物的雄激素营养作用均明显减弱.在所有实验组中,4-OHT、17-HEXE的雄激素营养作用均分别强于同浓度水平的4-OHA、EXE.　　3.DMBA乳腺癌造模SD大鼠经过四周不同药物处理后,DHT、4-OHT、17HEXE实验组肿瘤的相对体积大小分别为2.5、0.3、1.7,均明显小于对照组(10.2),三个实验组与对照组差异均有统计学意义P＜0.05).其中,4-OHT组肿瘤体积在四周药物处理后明显缩小.用药四周后DHT、4-OHT、17HEXE实验组和对照组的大鼠平均肿瘤数量分别为2.3个、1.6个、2.9个和4.3个,实验组与对照组差异均有统计学意义(p＜0.05).　　结论:1.在保证外源性雌二醇(E2)的前提下,甾体类AIs及其17-羟基代谢产物可以抑制AR(+)乳腺癌细胞系的生长,而对AR(-)乳腺癌细胞系没有作用效果.　　2.甾体类AIs及其17-羟基代谢产物对去势雄性大鼠的前列腺、精囊、肛提肌有雄激素营养作用.因此提示其可以在活体动物中通过雄激素受体通路发挥作用.　　3.局部病灶直接涂抹4-OHT、17HEXE膏剂可以不通过阻断雌激素受体通路而抑制SD大鼠乳腺癌肿瘤的生长并防止新的肿瘤出现,这种作用与内源性雌激素水平无关.这种抑癌作用极有可能是通过激活雄激素受体实现的.这可能是非甾体类AIs治疗失败后可换用甾体类AIs的原因之一.

目录

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

1.1 实验细胞

1.2 实验动物

1.3 实验仪器

2 主要实验试剂、耗材、试剂盒

2.1本文在实验过程中采用的主要试剂、耗材、试剂盒见下表

2.2实验主要溶液配制

3.1细胞实验

3.2 雄性大鼠去势实验

3.3 大鼠乳腺癌肿瘤研究

4 统计学处理

结果

1 试验药物对乳腺癌细胞增殖的影响

1.1 MCF-7人乳腺癌细胞系

1.2 ZR-75-1人乳腺癌细胞系

1.3 MDA-MB-231乳腺癌细胞系

2 试验药物对Wistar大鼠的作用

2.1 前列腺

2.2 精囊

2.3 肛提肌

3 试验药物对Wistar大鼠的作用

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:芳香化酶抑制剂耐药的研究现状

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