PI3K/Akt/eNOS信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制

摘要

目的：探讨磷酯酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶/内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号通路在氢吗啡酮(Hydromophine)后处理减轻离体大鼠心脏缺血再灌注损伤中的作用，为心脏缺血再灌注保护提供理论依据。　　方法：将健康雄性SD大鼠50只，体重250～320g，随机分为5组(n=10只)：(1)对照组（C组）：平衡灌注120min，不予其它处理;(2)缺血再灌注组(I/R组)：平衡灌注30min，予以缺血30min，再灌注60min处理;(3)氢吗啡酮后处理组（H组）：平衡灌注30min，然后缺血30min，再灌注前10min用含有0.3μmol/L氢吗啡酮的K-H液灌注进行后处理，最后平衡灌注50min;(4)氢吗啡酮后处理+PI3K抑制剂组（HL组）：平衡灌注30min，然后缺血30min，再灌注前10min用含有0.3μmol/L氢吗啡酮和15μmol/L LY294002的K-H液灌注进行后处理，最后平衡灌注50min;(5)PI3K抑制剂（L组）：平衡灌注30min，然后缺血30min，再灌注前10min用含15μmol/L LY294002的K-H液灌注进行后处理，最后平衡灌注50min。观察指标：(1)在灌注过程中实时监测大鼠心脏的心功能指标，包括心率（HR）、左室的收缩压(LVSP)和舒张末压(LVEDP)，左心室内压最大上升速率和最大下降速率。通过控制K-H液的流速调整心脏功能状态，并分别于平衡灌注30分钟末(T0)m、再灌注之后的10分钟(T1)、30分钟(T2)和60分钟(T3)时，记录心脏心率(HR)、左室发展压(LVDP)和左心室压力最大上升及下降速率(±dp/dtmax)，并计算出大鼠心脏RPP值和左心室压力最大上升及下降速率恢复值。(2)于T3时取心脏采用硝化还原法测各组心肌组织中NO含量，采用TTC染色法测定心肌梗死面积(AN/ARR)。(3)于T3时取心脏采用Western blot方法，GAPDH为内参，测定左心室心肌组织Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS的蛋白表达水平。　　结果：与C组比较，其它4组大鼠T2、T3时RPP值降低，左心室内压上升及下降速率恢复值下降，心梗面积下降,心肌组织NO含量下降(P＜0.05)，I/R组心肌组织p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS蛋白表达增加(P＜0.05);与I/R组比较，H组大鼠T2、T3时心脏RPP值升高和左心室上升速率和下降速率恢复值明显升高，心肌组织NO含量(139.31±10.17)μmol/L升高，心梗面积(37.5±3.41)％减少，心肌组织p-Akt/Akt(0.67±0.12)和p-eNOS/eNOS(0.71±0.15)表达上升，各组差异均具有统计学意义(P＜0.05);与H组比较，HL组大鼠T2、T3时RPP值降低，左心室内压上升及下降速率恢复值下降，心肌组织NO含量(125.89±15.10)μmol/L减少，心梗面积(43.5±5.62)％增加，心肌组织p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS分别为(0.53±0.14)、(0.62±0.16)，表达均下降，差异具有统计学意义(P＜0.05);与HL组比较，L组大鼠T2、T3时RPP值降低，左心室内压上升及下降速率恢复值下降，心肌组织NO含量下降，心梗面积增加，心肌组织p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS表达下降，各组差异均具有统计学意义(P＜0.05)。　　结论：经氢吗啡酮后降低大鼠心肌缺血再灌注损伤的机理可能与激活P13K-Akt-eNOS信号通路，增加内源性NO释放有关。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验动物

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学分析

结果

1 一般情况

2 五组大鼠离体心脏心率-血压乘积(RPP)值比较

3 四组大鼠离体心脏左室内压最大上升速率(+dp／dtmax)恢复值(％)比较

4 五组大鼠离体心脏左室内压最大下降速率(-dp／dtmax)恢复值(％)比较

5 硝化还原法检测心肌组织的一氧化氮(NO)

6 Western blot检测相关蛋白的表达情况

7 四组大鼠离体心脏心肌梗死面积(AN／ARR)的比较

讨论

1 心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型选择和建立

2 氢吗啡酮后处理减轻缺血再灌注损伤的作用

3 氢吗啡酮后处理保护心肌缺血再灌注的机制研究

4 小结

结论

不足之处

设想与展望

参考文献

英汉缩略语名词对照

致谢

PI3K-Akt-eNOs信号通路与心肌缺血后适应的研究进展(综述)

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