关节熏洗仪联合独活寄生汤调控老年自然退变膝关节炎食蟹猴的机制研究

摘要

目的：膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis)，是随着年龄增长主要以关节自然软骨退变和破坏为致病机制的一种临床多发病、常见疾病。其主要表现为膝关节关节间隙疼痛、肿胀感、畸形、局部出现骨质增生严重者导致其功能障碍等。早在全球疾病负担的2010研究报告中，该疾病就占据首位。即使在美国，该病的致残率也相当高。本研究目的在于从分子生物学上探讨关节熏洗仪介导Notch3、JAG1和蛋白聚糖ACAN在缓解老年食蟹猴自然退变膝关节炎中的作用。　　方法：第一部分：将8只老年(22-25.1岁，体重5.0-7.4kg)食蟹猴，（A组）和青年(3-5.2岁，体重5.5-6.9kg)食蟹猴（B组），通过基线对比、膝关节X-Ray、膝关节液指标WBC、IL-1β、TGF-β1和MMP-13检测以及关节软骨Brittberg scores评分和Mankin score来选择自然退变的老年膝关节食蟹猴模型;第二部分：将15只SPF老年食蟹猴自然退变的膝关节炎（22-25.3岁，体重5.2-7.1kg）（方法同第一部分），随机分为3组，每组5只，新型熏闭式洗组（A组）、传统熏洗组（B组）和生理盐水对照组（C组）。分别早晚各一次行膝关节熏洗，8周后处死猴子，获取膝关节软骨标本并用分子学检测方法RT-qPCR和Western-blot检测Notch3、JAG1和ANCN的变化情况。　　结果：第一部分：两组食蟹猴基线对比无统计差异，老年食蟹猴膝关节X片K-L(Kellgren-Lawrence)分级符合骨性关节炎诊断要求;生物学指标WBC、IL-1β、TGF-β1和MMP-13两组对比(P＜0.05)有统计学意义;关节软骨Brittberg score评分和Mankin score两组对比(P＜0.05)有统计学意义;第二部分：Western-blot检测的关节熏洗仪组和传统熏洗组Notch3、JAG1均下降而ANCN上升，Notch3/β-actin分别为：0.36±0.04、0.54±0.02和0.83±0.03，(P＜0.05)三组对比有统计学意义;JAG1/β-actin分别为：0.48±0.01、0.82±0.04和1.19±0.06，(P＜0.05);ACAN/β-actin分别为：1.16±0.04、0.84±0.05和0.48±0.18，(P＜0.05)。同样，通过RT-qPCR检测各组食蟹猴关节软骨中Notch3、JAG1和ACAN的相对表达量，Notch3、JAG1均下降而ANCN上升。　　结论：第一部分：通过基线对比、膝关节X-Ray、膝关节液指标WBC、IL-1β、TGF-β1和MMP-13检测以及关节软骨Brittberg score和Mankin score成功的选择了老年自然退变食蟹猴膝关节模型;第二部分：通过三组对比，关节熏洗仪和传统熏洗联合独活寄生汤对膝关节骨性关节炎治疗均有效果，但是关节熏洗仪组效果最佳，能有效抑制Notch3、JAG1的表达，促进ANCN表达，进一步延缓膝关节软骨的退变和破坏，从而有效推迟骨性关节炎到来，是一种副作用小，安全方便临床治疗方式。

目录

摘要

前言

第一部分：建立老年自然退变的食蟹猴KOA模型

1 材料与方法

2 具体评估方法

3 结果

4 讨论

5 本研究的不足

6 结论

第二部分：RT-PCR、Western-Bloting检测老年KOA食蟹猴标本Notch3、JAG1和ACAN

1 材料与方法

2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

致谢

读研期间科研成果

Notch信号通路在软骨细胞分化过程中的作用 综述

声明