肿瘤干细胞样细胞在膀胱癌进展及耐药中的作用及机制研究

摘要

膀胱癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，手术切除是膀胱癌患者的首选治疗方案，但部分肿瘤会出现复发并进展为肌层浸润性膀胱癌或转移性膀胱癌，且这些患者在应用全身化疗后易于发生化疗耐药，这些因素都导致了膀胱癌患者的不良预后。肿瘤干细胞样细胞是肿瘤细胞的一个亚群，他们具有强大的干细胞特性，包括自我更新和肿瘤起始能力。肿瘤干细胞样细胞与多种肿瘤（包括膀胱癌）的异质性、进展和化疗耐药有密切关系。因此，揭示调控肿瘤干细胞样细胞的分子机制可能有助于找到针对晚期和化疗抵抗膀胱癌的新疗法，从而改善膀胱癌患者的预后。　　许多研究报道膀胱癌干细胞样细胞可以通过某些标志物进行分离，并且许多信号通路参与调控膀胱癌干细胞样细胞的自我更新能力、化疗耐药性和肿瘤起始特性。然而，维持膀胱癌干细胞样细胞的干细胞特性的潜在分子机制尚未充分阐明。　　有研究表明Hippo通路的关键分子--YAP在干细胞和多种肿瘤干细胞样细胞中的肿瘤起始和自我更新中起着至关重要的作用，但YAP在膀胱癌干细胞样细胞中的作用及相关分子机制尚未明确。前期研究表明上皮标记物OV6可以用作上皮衍生的恶性肿瘤肿瘤干细胞样细胞的标记物，我们研究发现OV6阳性膀胱癌细胞具有强烈的干细胞特性，而YAP能通过YAP/TEAD1/PDGF-BB/PDGFR自分泌环路促进OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞的自我更新、侵袭、迁移和耐药性。　　目的：　　1、探讨膀胱癌组织中OV6表达水平与膀胱癌异质性和患者预后的相关性。　　2、探讨OV6阳性膀胱癌细胞是否具有肿瘤干细胞样细胞特性。　　3、深入探究维持膀胱癌干细胞样细胞特性的内在分子机制，为靶向逆转膀胱癌化疗耐药提供新的依据。　　方法与结果：　　1、通过免疫组织化学染色检测人膀胱癌样本中上皮标志物OV6的表达，并分析OV6表达水平与膀胱癌患者临床病理信息和预后的相关性。　　结果表明，OV6高表达与膀胱癌患者的疾病进展和不良预后呈正相关，单变量和多变量cox回归分析表明OV6表达水平是膀胱癌患者预后的独立危险因素。　　2、通过磁分选(MACS)的方法将OV6阳性和OV6阴性膀胱癌细胞分离并进行对比研究。运用成球实验、成瘤实验、耐药实验等方法分析两组细胞的肿瘤干细胞特性。　　结果表明，与OV6阴性细胞相比，OV6阳性膀胱癌细胞具有显著的肿瘤干细胞特性，包括自我更新能力，肿瘤起始能力和化疗耐药性。　　3、通过转录组测序，细胞因子抗体芯片检测，免疫共沉淀(co-IP)，染色质免疫共沉淀(ChIP)和其他实验来进一步明确OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞的内在分子机制。建立膀胱癌原位小鼠模型以评估YAP抑制剂（维替泊芬）和PDGFR抑制剂(CP-673451)对OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞的顺铂抗性的逆转作用。　　结果表明，Hippo通路的关键分子YAP对于维持OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞特性起了重要作用，YAP通过募集转录因子TEAD1进而促进PDGFB转录。同时肿瘤细胞自分泌的PDGF-BB因子通过其受体PDGFR能进一步稳定YAP并促进YAP入核发挥转录调控作用。此外，维替泊芬或CP-673451能阻断YAP/TEAD1/PDGF-BB/PDGFR自分泌信号环路，进而抑制膀胱癌原位小鼠模型中OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞的顺铂抵抗性。　　结论：　　在本项研究中，我们发现OV6高表达与膀胱癌患者的疾病进展和不良预后呈正相关，OV6可能是能预测膀胱癌患者疾病进展和预后的重要指标。OV6阳性膀胱癌细胞具有显著的肿瘤干细胞样细胞特征，YAP/TEAD1/PDGF-BB/PDGFR自分泌环路是维持其肿瘤干细胞样细胞特性的重要分子机制。靶向自分泌环路效能逆转膀胱癌原位小鼠模型中OV6阳性膀胱癌细胞对于顺铂的抗性，这为改善膀胱癌耐药性、提高顺铂疗效并最终改善患者预后提供了临床前研究的理论基础。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分OV6可作为预测膀胱癌患者疾病进展和预后的重要指标

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第二部分OV6阳性膀胱癌细胞具有肿瘤干细胞特性，并促进膀胱癌的原位致瘤性、侵袭、转移和耐药

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

第三部分靶向阻断YAP／TEAD1／PDGF-BB／PDGFR自分泌调节环路能逆转OV6阳性膀胱癌干细胞样细胞的化疗耐药性

一、材料和方法

二、结果

三、讨论

全文总结

参考文献

文献综述

攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况说明

致谢