抗凝血因子Ⅰ与凝血因子IX结合反应及纳米Fe3O4对镉毒性的抑制作用研究

摘要

全文分成两个部分，第一部分主要研究了抗凝血因子Ⅰ与凝血因子Ⅸ结合反应以及钙离子对该结合的影响；第二部分是关于纳米粒子与重金属毒性的毒性相互作用，由于纳米粒子的广泛运用，纳米粒子的毒性受到关注，另一方面重金属污染日益严重，对生态环境造成巨大损害。过去的研究主要着眼于其中某一个对象的研究，而对纳米粒子和重金属的协同作用研究较少。本文就目前应用广泛的纳米Fe3O4与重金属Cd对小鼠毒性的协同作用进行研究，发现Fe3O4可以抑制CdCl2对小鼠肝脏的毒性，具有负协同效应。全文共分为四章。
　　 第一章：介绍了凝血过程、C-型凝集素类似蛋白、凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白的研究；研究凝血因子Ⅸ/Ⅹ结合蛋白常用的实验手段，包括离子交换层析、荧光、聚丙烯酰胺凝胶电泳和表面等离子体技术。
　　 第二章：用阴阳离子交换层析方法从蛇毒中分离纯化出ACFⅠ，运用电泳和SPR技术检测 和FIX结合反应以及钙离子对ACFⅠ和FIX结合反应的影响，钙离子可以诱导ACFⅠ和FIX的结合，而且不同浓度的的钙离子对ACFⅠ和FIX结合影响不同。通过SPR动力学分析发现当钙离子浓度为0.25mM时，二者亲和力最强，在高于0.25mM时会抑制ACFⅠ和FIX的结合。说明了钙离子在ACFⅠ和FIX结合中起开关的作用。同时也说明了ACFⅠ和FIX的结合在ACFⅠ的抗凝血活性中起主要作用。
　　 第三章：概述了纳米粒子的基本性质、纳米金属氧化物的毒性及用表面包裹降低毒性的研究、磁性纳米粒子的毒性研究、Cd引起的氧化应激反应和体内微量元素失衡、Cd在体外细胞实验中的毒性机理、毒物的联合作用和毒性检测指标。
　　 第四章：研究了CdCl2和纳米Fe3O4联合暴露对小鼠短期毒性的协同作用。发现同时注射nano-Fe3O4+CdCl2组的脏器系数、血液检测中ALT、AST、LDH、TP、肝脏的酶活力MDA都低于CdCl2组，而血检中的TBIL、A/G以及肝脏中的SOD、GPx值高于CdCl2组。在肝脏和肾脏中注射纳米Fe3O4+CdCl2组的Cd镉含量显著低于CdCl2组。组织切片显示，注射nano-Fe3O4对小鼠各器官没有明显毒性，注射CdCl2组肝组织坏死严重，但是在Fe3O4+CdCl2组中没有发现坏死。实验结果显示Cd短期毒性主要表现在对小鼠的肝脏和肾脏损伤，对其它组织器官影响较小。多种酶活性和生物代谢物分析以及病理切片分析结果显示,纳米Fe3O4可以抑制CdCl2对小鼠肝脏和肾脏的损伤。因此纳米Fe3O4可以作为Cd中毒患者理想的磁共振成像造影剂。