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摘要
第一章 文献综述
1.1 叶绿素
1.2 叶绿素的生物合成及相关酶基因的克隆
1.2.1 谷氨酸→胆色素原
1.2.2 胆色素原→原卟啉Ⅸ
1.2.3 原卟啉Ⅸ→叶绿素酸酯a
1.2.4 叶绿素酸酯a→叶绿素a和叶绿素b
1.3 原叶绿素酸酯氧化还原酶(POR)
1.3.1 原叶绿素酸酯氧化还原酶的生物学功能
1.3.2 原叶绿素酸酯氧化还原酶基因的研究进展
1.4 叶绿素酸酯a氧化酶(CAO)
1.4.1 叶绿素酸酯a氧化酶的生物学功能
1.4.2 叶绿素酸酯a氧化酶基因的研究进展
1.5 研究目的与意义
1.6 技术路线
第二章 原叶绿素酸酯氧化还原酶基因和叶绿素酸酯a氧化酶基因的克隆与序列分析
2.1 试验材料
2.1.1 植物材料与菌株
2.1.2 仪器与试剂
2.1.3 基因克隆引物设计
2.2 试验方法
2.2.1 总RNA的提取及cDNA的合成
2.2.2 基因保守区序列的RT-PCR扩增
2.2.3 5’ RACE扩增PjPORB和PjCAO基因5’端序列
2.2.4 3’ RACE扩增PjPOgB和PjCAO基因3’端序列
2.2.5 PjPORB和PjCAO基因ORF的扩增
2.2.6 PCR产物回收
2.2.7 回收产物与载体连接
2.2.8 大肠杆菌感受态的制备
2.2.9 连接产物转化及阳性克隆筛选
2.2.10 菌检及测序
2.2.11 基因序列生物学信息学分析
2.3 结果与分析
2.3.1 总RNA的提取
2.3.2 基因保守区的扩增
2.3.3 基因5’ RACE
2.3.4 基因3’ RAcE
2.3.5 基因ORF区的扩增
2.3.6 基因的序列分析
2.4 讨论
第三章 PjPORB和PjCAO基因的时空表达谱
3.1 试验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 仪器与试剂
3.1.3 定量RT-PCR引物设计
3.2 试验方法
3.2.1 提取总RNA
3.2.3 cDNA链的合成
3.2.4 实时定量RT-PCR
3.3 结果与分析
3.3.1 PjPORB基因表达分析
3.3.2 PjCAO基因表达分析
3.4 讨论
第四章 农杆菌介导PjPORB和PjCAO基因遗传转化拟南芥
4.1 试验材料
4.1.1 植物材料与菌株
4.1.2 试剂与仪器设备
4.1.3 植物表达载体构建引物的设计
4.2 试验方法
4.2.1 质粒的提取
4.2.2 ORF区酶切位点的添加
4.2.3 基因和pC1301的限制性酶切处理
4.2.4 酶切产物的回收
4.2.5 酶切产物的连接
4.2.6 连接产物转化大肠杆菌及阳性克隆筛选
4.2.7 菌检及测序
4.2.8 电击法农杆菌感受态的制备
4.2.9 植物表达载体转化农杆菌及阳性克隆筛选
4.2.10 农杆菌菌液提取质粒及PCR验证
4.2.11 拟南芥植株的培养
4.2.12 浸花法介导拟南芥的遗传转化
4.2.13 转基因种子的筛选
4.2.14 转基因再生植株的验证
4.2.15 纯系转基因植株的获得
4.2.16 转基因植株叶绿素含量(SPAD值)的测定
4.3 结果与分析
4.3.1 植物表达载体的构建
4.3.2 转基因种子的抗性筛选
4.3.3 转基因再生植株的验证
4.3.4 T1代转基因再生植株的获得
4.3.5 T1代转基因植株的叶绿素含量(SPAD值)
4.4 讨论
第五章 结论与展望
5.1 研究结论
5.2 研究展望
参考文献
个人简介
在校期间发表论文情况
致谢
浙江农林大学;