基于CRISPR--Cas系统的新型冠状病毒及D614G突变位点的快速检测

目录

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摘要

图表及公式清单

英文缩略词

1前言

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1样本来源

2．1．2主要试剂

2．1．3实验用主要试剂配制方法

2．1．4主要仪器

2．2实验方法

2．2．1新型冠状病毒基因序列分析

2．2．2寻找新型冠状病毒CRISPR-Cas核酸检测靶点

2．2．3设计合成各检测靶点的crRNA

2．2．4检测靶点阳性质粒标准品

2．2．5各检测靶点核酸扩增

2．2．6基于CRISPR-Cas系统的核酸检测

2．2．7CRISPR-Cas12a／Cas13a核酸检测系统的特异性

2．2．11新型冠状病毒核酸样本CRISPR-Cas荧光检测

2．2．12统计分析及所用软件

3结果

3．1．3筛选CRISPR-Cas12a核酸检测靶点

3．1．4ORF1ab-1和ORF1ab-4检测靶点恒温扩增引物的设计与筛选

3．1．5ORF1ab-1和ORF1ab-4检测靶点的特异性

3．1．6ORF1ab-4靶点的检测下限

3．1．7新型冠状病毒核酸样本ORF1ab-4靶点CRISPR荧光检测

3．2N基因的核酸检测

3．2．1 CRISPR-Cas12a核酸检测

3．2．2 CRISPR-Cas13a核酸检测

3．3新型冠状病毒D614G突变位点鉴定

3．3．2筛选D614G突变位点CRISPR-Cas12a鉴定靶点

3．3．3D614G突变位点鉴定恒温扩增引物的设计与筛选

3．3．4D614G突变位点鉴定的检测下限

4讨论

5结论、创新性、局限性和展望

参考文献

综述

附录

个人简历

致谢