补肾化瘀生新方对衰老模型大鼠骨髓间充质干细胞的影响

摘要

目的：　　探究补肾化瘀生新方对衰老模型大鼠脑组织中骨髓间充质干细胞（BMSCs）的作用及其抗衰老机制，论证“肾虚血瘀，生新乏力”致衰理论的科学性。　　方法：　　50只雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组及补肾化瘀生新方高、中、低剂量组。除空白组外，其余各组大鼠每日在其颈背部皮下注射D-半乳糖（125mg/kg·d），建立大鼠衰老模型，并开始灌胃。空白组以及模型组用生理盐水灌胃，而补肾化瘀生新方高、中、低剂量组，分别用补肾化瘀生新方高、中、低剂量灌胃。于第45天取材，采用HE染色法观察各组脑组织海马CA1、CA3区病理变化；免疫荧光法测定各组大鼠脑组织中CD105、CD105-p53、CD105-p21蛋白的含量，比较各组间CD105、CD105-p53、CD105-p21蛋白的表达。　　结果：　　⑴各组大鼠实验前后一般状况比较：从整个实验过程来看，空白组大鼠精神状态一直较活跃，反应灵敏，毛发光泽，体重增长快；模型组在实验中后期逐渐出现精神萎靡、反应迟钝，掉毛明显，毛色暗黄，活动减少，善蜷缩，体重增长慢等衰老体征。补肾化瘀生新方高、中、低剂量组大鼠在精神状态、皮毛色泽、饮食活动、体重增长等方面较模型组均有不同程度改善。⑵各组大鼠在实验不同阶段体重平均值比较：实验前各组大鼠平均体重水平接近（P>0.05），随着实验进行，实验半个月及一个月各组平均体重均有增长，但差别不大（P>0.05），实验后期，空白组平均体重增长较快，与之相比，模型组平均体重不升反降（P<0.05），中、低剂量组平均体重增长较慢（P<0.05），高剂量组与之最接近（P>0.05）；各中药组间相比，补肾化瘀生新方中剂量组与低剂量组平均体重增长值较接近（P>0.05），而高剂量组平均体重增长值明显高于中低剂量组（P<0.05）。⑶各组大鼠脑组织海马CA1、CA3区HE染色观察：空白组大鼠海马CA1、CA3区可见3-4层排列紧凑整齐的神经元细胞，胞质胞核饱满，神经纤维排列紧密，未见炎细胞，无胶质细胞增生，毛细胞血管未见扩张。模型组大鼠海马CA1、CA3区神经元细胞排列散乱无规则且大量空泡变性，部分胞核胞质界限不清并伴核仁皱缩现象，神经纤维排列疏松，可见胶质细胞增生，毛细血管扩张、水肿。补肾化瘀生新方各剂量组海马区病理变化较模型组均有不同程度的改善。⑷各组大鼠脑组织中CD105蛋白表达情况：与模型组相比，空白组CD105表达较少（P<0.05），高、中剂量组CD105表达较多（P<0.05），低剂量与之较接近（P>0.05）。各中药组CD105蛋白表达均比空白组表达多（P<0.05）。各中药组间比较，高剂量与中剂量组表达水平较接近（P>0.05），低剂量组表达水平较低（P<0.05）。⑸各组大鼠脑组织中CD105-p53蛋白表达的比较：实验各组中模型组及中药低剂量阳性细胞数均较多，两者对比差异不大（P>0.05）；而空白组、中药高、中剂量组与之相比阳性细胞数较少（P<0.05）。各中药组阳性细胞数均比空白组多（P<0.05）。各中药组间相比，高剂量组阳性细胞数最少，中剂量组次之，低剂量组最多（P<0.05）。⑹各组大鼠脑组织中CD105-p21蛋白表达的比较：实验各组中模型组阳性细胞数最多，空白组、各中药组与之相比均较少（P<0.05）。中药中、低剂量组阳性细胞数均比空白组多（P<0.05），而高剂量组与空白组水平接近（P>0.05）。中药高剂量组阳性细胞数比中、低剂量少（P<0.05），而中、低剂量水平接近（P>0.05）。因此，补肾化瘀生新方可以减慢衰老大鼠体重下降；改善衰老大鼠脑组织海马细胞带胞核固缩、炎性细胞浸润等病理变化；增加衰老大鼠脑组织中CD105蛋白的表达；减少衰老大鼠脑组织中CD105-p53、CD105-p21蛋白的表达。　　结论：　　补肾化瘀生新方具有延缓衰老的作用，其机制可能是通过动员 BMSCs归巢、增加BMSCs数量、延缓BMSCs衰老从而增强了干细胞的分化替代功能，达到延缓衰老的目的。

目录

声明

中英文缩略词

前言

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

3 脑组织HE染色及免疫荧光

4 统计学分析

结果

1各组大鼠一般情况比较

2各组大鼠体重变化比较

3 各组大鼠脑组织海马CA1、CA3区HE染色观察

4 各组大鼠脑组织中CD105蛋白的含量比较

5 各组大鼠脑组织中CD105-P53、CD105-P21蛋白表达的比较

讨论

1 立法依据

2 动物模型评价

3 补肾化瘀生新方对各组大鼠一般状况的影响

4 补肾化瘀生新方对各组大鼠体重变化的影响

5 补肾化瘀生新方对衰老大鼠海马CA1、CA3区组织形态的影响

6 补肾化瘀生新方对BMSCs的影响

7 补肾化瘀生新方对衰老大鼠脑组织中CD105-p53、CD105-p21蛋白的影响

8 补肾化瘀生新方延缓衰老及保护BMSCs机制探讨

9 本实验的不足之处及展望

结论

致谢

参考文献

附录1 各组大鼠脑组织HE染色图片

附录2 各组大鼠脑组织中CD105蛋白免疫荧光图片

附录3 各组大鼠脑组织中CD105-p53免疫荧光双标图片

附录4 各组大鼠脑组织中CD105-p21免疫荧光双标图片

附录5 文献综述:干细胞应用进展及其衰老的调控机制

附录6 在校期间论文论著和科研情况