跑台运动对脑缺血大鼠空间记忆、Ku蛋白与细胞周期蛋白的影响

摘要

目的：探讨跑台运动对大鼠高血脂脑缺血再灌注后海马区Ku蛋白和细胞周期蛋白的作用。　　方法：本实验将SPF级雄性高血脂诱导的Wistar大鼠120只随机分为：对照组（n=40），模型组（n=40）、实验组（n=40）。高血脂模型采用高血脂饲料喂养6周形成高血脂大鼠后。实验组于建模前15天开始进行跑台运动20m/min，30min/day，应用四血管阻断法（Pulsinelli4VO法）制备全脑缺血模型，分别于缺血15min再灌注后3h、6h、24h和48h四个时间点处死大鼠，缺血再灌注后24h和48h大鼠在处死前采用水迷宫检测各组大鼠视空间记忆。各时间点的标本采用苏木素-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）观察各组大鼠脑组织神经元细胞形态的变化情况；采用免疫组织化学染色和免疫印迹蛋白（western-blotting）方法检测各组大鼠脑组织中Ku70、Ku80、CycinA和CyclinE蛋白的表达情况。应用SPSS17.0统计分析软件对所得实验数据进行重复设计的单因素方差分析，以P<0.05，表示差异具有统计学意义。　　结果：1水迷宫检测结果：与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（24h、48h）的潜伏期时间显著延长，穿台次数显著减少，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（24h、48h）的潜伏期时间显著缩短而穿台次数显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）。2形态观察结果（HE染色）对照组大鼠海马区神经元细胞排列整齐，胞浆淡染；模型组与对照组比较3h结构形态即出现形态改变，表现为细胞失去正常结构，部分细胞形态异常，6h海马区可见较多肿胀的神经元，间质水肿，结构疏松，神经元和胶质细胞出现核固缩、深染，也有部分神经元胞核完全消失，形成空泡状结构；24h脑组织神经细胞破坏，可见较多变性坏死的神经细胞，神经细胞呈空泡状或海绵状，神经元细胞出现核固缩、碎裂和核仁消失现象，间质水肿明显；48h可见坏死神经细胞，脑组织结构破坏，结构疏松，核膜碎裂、核仁消失，各时间点中以48h损伤最严重；实验组大鼠海马区神经元损伤较模型组明显减轻，可见坏死的神经元减少，间质水肿较轻，核固缩和空泡较少。3 Ku70免疫组化和Western blot分析结果：免疫组化结果：Ku70免疫组化染色呈棕黄色，定位于细胞胞浆中，主要表达在神经元细胞。与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表达增加，且24h达高峰，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot分析结果：与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h） Ku70蛋白的表达增加，且24h达高峰，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。4 Ku80免疫组化和Western blot分析结果：免疫组化结果：Ku80免疫组化染色呈棕黄色，定位于细胞胞核中，主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表达明显增加，且6h达高峰，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot分析结果：与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表达明显增加，且6h达高峰，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。5 CyclinA免疫组化和Western blot分析结果：免疫组化结果：CyclinA免疫组化染色呈棕黄色，定位于细胞胞核中，主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinA蛋白的表达量逐渐增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h） CyclinA蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot分析结果：与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinA蛋白的表达量逐渐增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinA蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。6 CyclinE免疫组化和Western blot分析结果：免疫组化结果：CyclinE免疫组化染色呈棕黄色，定位于细胞胞核中，主要表达在海马区神经细胞。与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表达逐渐降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h） CyclinE蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；Western blot分析结果：与对照组比较，模型组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，实验组大鼠在各时间点（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）。　　结论：1跑台运动可改善全脑缺血再灌注大鼠空间记忆功能。2跑台运动可增加Ku蛋白的表达，同时调控CyclinA和CyclinE的表达，对脑缺血有保护作用。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

英文缩略表

引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 材料

1.1.2 实验方法与步骤

1.1.3 统计学方法

1.2 结果

1.2.1 模型判断

1.2.2 HE染色结果

1.2.3跑台运动对脑缺血再灌注大鼠空间记忆的影响

1.2.4 跑台运动对各组大鼠Ku70蛋白的影响

1.2.4 跑台运动对各组大鼠Ku80蛋白的影响

1.2.5 跑台运动对各组大鼠CyclinA的影响

1.2.6 跑台运动对各组大鼠CyclinE的影响

1.3 讨论

1.3.1 跑台运动对高血脂全脑缺血再灌注大鼠视空间记忆的影响

1.3.2 跑台运动对高血脂大鼠全脑缺血再灌注后海马区Ku蛋白的影响

1.3.3 跑台运动对高血脂大鼠全脑缺血再灌注后细胞周期蛋白的影响

1.4结论

参考文献

第2章 综 述

2.1 Ku蛋白的结构及其生物活性

2.2 Ku蛋白在脑缺血中的作用

2.3 细胞周期蛋白的结构及其生物活性

2.4 细胞周期蛋白在脑缺血中的作用

2.5 Ku蛋白和细胞周期蛋白在脑缺血中的相互作用

参考文献

致谢

导师简介

作者简介

学位论文数据集