Cs菌丝粉对大鼠脓毒性急性肾损伤中klotho蛋白表达的影响

摘要

目的：通过检测脓毒血症急性肾损伤大鼠肾组织中 klotho蛋白的表达情况，并应用Cs菌丝粉干预，来研究klotho蛋白在脓毒血症急性肾损伤发病机制中的作用。　　方法：选取健康雄性 SD大鼠72只（等级：SPF），体重250g左右，4周龄，随机分为空白对照组（n=16）、CLP组（模型组）（n=28）、Cs菌丝粉干预组（n=28）。对照组普通进食水，开腹后找到盲肠只作轻轻挤压，不结扎穿刺，模型组普通进食水，行 CLP术；干预组为 Cs菌丝粉干预组，于术前1周开始冬虫夏草[Cs]组5g/(kg·d）灌胃，行CLP术。对照组术前15 min、术后3 h皮下注射生理盐水20mg/kg，后2组分别于术前15 min、术后3 h皮下注射盐酸左氧氟沙星20 mg/kg，术后为补充手术过程中丢失体液量给以生理盐水5 ml/kg皮下注射。每组分别于术后6h、12h、24h通过腹主动脉采血（对照组每组每个时间点2只，其余每组每个时间点6只），然后分离血清（用3000 r/min离心机离心15min），检测血清肌酐及尿素氮，ELISA法测定肾组织匀浆中的klotho蛋白、MDA、CAT水平；取静脉血做细菌培养；取出肾脏，将右肾放入4％多聚甲醛中固定24至48小时，之后用石蜡包被，通过HE染色观察肾组织病理损伤，免疫组化法检测 klotho蛋白表达及定位。每组于术后12小时分别随机取一只老鼠左肾上级约1cm3放入戊二醛中固定，用于电镜检测行电镜检测。每组余10只大鼠观察生物学行为变化及4天、7天存活率。　　结果：1、模型组大鼠精神欠佳，运动迟缓；进食水较少；毛发散乱直立。剖腹可见腹水为淡血性，且量较多，明显恶臭味；肠管充血水肿，肠管组织粘连较重，部分盲肠末端发黑。对照组无上述变化。干预组大鼠术后一般状况介于 A、模型组之间。2、血肌酐：干预组各时间点血肌酐浓度显著低于模型组（P<0.05），于12h后开始下降，24h接近对照组水平（P>0.05），但仍稍高于对照组；与对照组比较，模型组血肌酐浓度则显著升高（P<0.05）。3、血尿素氮：与对照组比较，模型组各时间点尿素氮水平均显著升高（P<0.05），干预组各时间点血尿素氮水平较模型组明显降低（P<0.05），但6h时与对照组差异不大（P>0.05），但仍明显高于对照组。4、免疫组化肾组织 klotho蛋白表达情况：与对照组、模型组相比，干预组肾组织 klotho蛋白表达明显上升（P<0.05）。5、肾组织匀浆 klotho蛋白水平：模型组血 klotho蛋白水平明显低于对照组（P<0.05），干预组则明显高于模型组（P<0.05）。6、肾组织匀浆MDA水平：模型组明显升高（P<0.05），干预组较模型组明显下降（P<0.05）。7、肾组织匀浆 CAT含量：干预组较模型组明显升高（P<0.05），模型组较对照组明显下降（P<0.05）。8、血细菌培养，对照组无细菌生长，模型组、干预组均可见细菌生长，可检出大肠杆菌、变形杆菌、假单胞菌属和少量格兰阳性球菌。9、对照组、模型组、干预组4天存活率分别为100%、30%、40%；干预组与模型组比较差异虽无统计学意义，但干预组死亡大鼠的存活时间可延长24h左右。对照组、模型组、干预组7天存活率分别为100%、20%、30%，模型组、干预组比较差异无统计学意义（P>0.05）。　　结论：1、Cs菌丝粉能增强脓毒性急性肾损伤大鼠 koltho蛋白的表达，对肾脏具有一定的保护作用。2、氧化应激损伤参与了脓毒性急性肾损伤的发病过程。3、Cs菌丝粉能改变脓毒性急性肾损伤大鼠的预后。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 材料

1.1.2 实验方法

1.1.3 病理切片制作和染色

1.1.4 图像分析

1.1.5 计量分析

1.1.6 统计学处理

1.2 结果

1.2.1 各组大鼠术后基本表现

1.2.2 病理组织学变化

1.2.3 各组生存率变化

1.3 讨论

1.4 结论

参考文献

第2章 综 述脓毒血症致全身各系统发病机制及其治疗的研究

2.1 呼吸系统

2.1.1 概况

2.1.2 机制

2.1.3 治疗

2.2 消化系统

2.3 循环系统

2.4 神经系统

2.5 血液系统

2.6 泌尿系统

参考文献

附录 附图

致谢

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