漆姑草提取物对人白血病细胞株HL-60和K562诱导分化作用的实验研究

摘要

目的：研究漆姑草提取物（HSJ）对人早幼粒白血病细胞HL-60和人慢性髓系白血病细胞K562的诱导分化作用，并探讨其诱导分化的作用机制。　　方法：实验设置药物组（2000、1000、500、250、125、62.5μg/mL HSJ）、阳性药对照组（100μg/mL吡柔比星）、阴性对照组，MTT法检测HSJ作用HL-60和K562细胞24、48、72 h的增殖抑制率。根据MTT结果设置药物组（250、125、62.5μg/mL HSJ）和阴性对照组，经HSJ作用HL-60和K562细胞48 h后，采用NBT还原实验法分别测定HL-60和K562细胞分化能力；瑞氏-吉姆萨染色法分别观察HL-60和K562细胞形态的变化；流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原CD11b和CD14阳性细胞的表达率以及K562细胞分化相关抗原CD11b、CD14、CD41a和CD42b阳性细胞的表达率；Western-Blot法检测HL-60细胞c-myc蛋白表达以及K562细胞GATA1和PU.1蛋白表达。　　结果：1. HSJ对HL-60细胞诱导分化研究实验结果：（1）HSJ能够抑制HL-60细胞的增殖，经 HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分别为251、156和102μg/mL。（2）NBT还原实验结果显示，HSJ能增加HL-60细胞的NBT还原能力，与阴性对照组的NBT还原率（0.83±0.29）%相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的NBT还原率（16.67±1.76）%、（10.83±1.26）%、（6.00±0.87）%提高，差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现，与阴性对照组比较，给药组 HL-60细胞核浆比例减小，核仁变为肾形或蚕豆形，出现明显的细胞分化形态。（4）流式细胞术检测HL-60细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率发现，和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率（41.13±0.42）%比较，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的CD11b阳性细胞表达率（66.77±4.27）%、（52.27±0.95）%、（46.27±0.38）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率（53.30±7.23）%比较，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的CD14阳性细胞表达率（96.63±0.23）%、（85.25±3.80）%、（63.84±0.78）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。（5）Western-Blot法检测 HL-60细胞分化相关蛋白c-myc的表达显示，和阴性对照组的c-myc蛋白表达（0.71±0.02）相比， HSJ（250、125、62.5μg/mL）组c-myc蛋白表达（0.38±0.01、0.45±0.01、0.58±0.02）降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。2. HSJ对K562细胞诱导分化研究实验结果：（1）HSJ能够有效抑制K562细胞的增殖，经 HSJ作用24 h、48 h和72 h后的IC50分别为195、112和80μg/mL。（2）NBT还原实验结果显示，HSJ能增加K562细胞的NBT还原能力，与阴性对照组的NBT还原率（0.92±0.17）%相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的NBT还原率（23.47±3.15）%、（9.33±2.56）%、（4.00±0.47）%提高，差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态发现，与阴性对照组比较，给药组K562细胞核浆比例减小，出现分叶状细胞核，部分细胞核凹陷，出现明显的细胞分化形态。（4）流式细胞术检测 K562细胞分化相关抗原阳性细胞的表达率，和阴性对照组的CD11b阳性细胞表达率（58.70±9.60）%比较，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的CD11b阳性细胞表达率（97.53±3.26）%、（90.93±1.90）%、（78.30±6.62）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；和阴性对照组的CD14阳性细胞表达率（52.43±5.40）%比较，HSJ（250、125μg/mL）组的CD14阳性细胞表达率（94.57±2.37）%、（83.05±6.86）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；和阴性对照组的CD41a阳性细胞表达率（53.37±8.03）%比较，HSJ（250、125μg/mL）组的CD41a阳性细胞表达率（94.57±2.25）%、（86.07±3.68）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；和阴性对照组的CD42b阳性细胞表达率（46.10±10.32）%比较，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的CD42b阳性细胞表达率（94.47±4.05）%、（84.33±2.73）%、（69.63±6.88）%增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。（5） Western-Blot法检测K562细胞分化相关蛋白表达显示，和阴性对照组的GATA-1蛋白表达（0.02±0.01）相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的GATA-1蛋白表达（0.63±0.04、0.57±0.03、0.18±0.02）增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；和阴性对照组的PU.1蛋白表达（0.01±0.01）相比，HSJ（250、125、62.5μg/mL）组的PU.1蛋白表达（0.53±0.02、0.17±0.03、0.11±0.01）增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。　　结论： HSJ对HL-60和K562细胞具有一定诱导分化作用，其能诱导HL-60细胞向成熟粒细胞、单核细胞方向分化；诱导K562细胞向成熟粒细胞、单核细胞、巨核细胞、红细胞方向分化。

目录

声明

英文缩略词表

0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 方 法

2 结果

2.1 HSJ对HL-60细胞的诱导分化作用

2.2 HSJ对K562细胞的诱导分化作用

3 讨论

3.1 HSJ对HL-60细胞的诱导分化作用

3.2 HSJ对K562细胞的诱导分化作用

4 结论

参考文献

综述：白血病诱导分化的细胞功能变化研究进展

作者简历

致谢

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