DENV-2感染小鼠ANA-1巨噬细胞补体mRNA动态和细胞极化的初探

摘要

目的：探讨DENV-2对小鼠ANA-1巨噬细胞胞内补体相关组分mRNA和细胞极化动态的影响。　　方法:用C6/36细胞增殖DENV-2，RT-PCR鉴定病毒，TCID50滴定病毒效价。分别以LPS/IL-4体外刺激小鼠ANA-1细胞3h、8h、12h及24h，Real-time PCR法检测IL-1β、CCL2、Arg-1细胞极化指标的变化，检测胞内C3、CfB、CRIg、C1q补体成分mRNA的动态。用DENV-2感染M0/M2极化的ANA-1巨噬细胞，Real-time PCR检测细胞的极化指标、NS1基因和Mavs抗病毒基因的表达，以及胞内补体C3、CRIg、C1q mRNA的动态。　　结果：　　1）细胞极化后补体mRNA动态：刺激3h后LPS组IL-1β、CCL2 mRNA表达上调，12h达高峰；IL-4组中以Arg-1 mRNA表达上调显著，于24h达高峰，提示LPS组细胞向M1方向极化，IL-4组向M2方向极化。两极化组的相应补体组分均表现为不同程度的上调，其中：①C1q、C3在ANA-1向M2极化8h后上调显著，12h时达高峰（2-ΔΔct分别为94.9±12.9和11.3±2.4）；②CfB因子在M1极化组中上调显著，12h表达上调达高峰（2-ΔΔct为61.4±6.2）；③CRIg在两组中均在24h时表达上调且具有显著性差异（P<0.05）。　　2）DENV-2感染M0/M2状态的ANA-1细胞后补体mRNA动态：①感染后C1q mRNA表达均受抑制，且M2感染组比M0感染组C1q表达均较高（差异具有统计学意义）；②3h时M2感染组C3 mRNA表达受抑制，12h时上调2-ΔΔct为5.08±2.25。与M0感染组相比，12h和24h时两组间差异有统计学意义；③除12h检测点外，DENV-2感染后CRIg表达均上调或在正常水平。④DENV-2感染后M2细胞CfB基因表达均被下调，但与感染 M0组比较两组无明显差异。　　3）DENV-2感染后M0/M2状态的ANA-1细胞后细胞极化的动态: DENV-2感染M0细胞后IL-1β、CCL2和Arg-1表达均受抑制，Arg-1基因于24h时恢复正常。DENV感染逆转M2细胞Arg-1基因的表达。　　4）感染后胞内NS1、Mavs mRNA的动态：24h内各感染组间NS1和Mavs基因的表达差异无统计学意义。　　结论：　　1）不同极化ANA-1细胞表达补体成分mRNA不同：M1极化细胞较高表达CfB，M2极化细胞高表达C1q、C3和CRIg。　　2）DENV-2感染不同极化状态的细胞后补体mRNA表达的差异：DENV-2下调M2型ANA-1细胞C1q和C3的表达，而CRIg保持正常水平或表达上调;与感染的M0细胞相比，C1q、CRIg在M2感染组相对上调。　　3）DENV-2可逆转或延迟感染细胞的极化。　　4）感染后胞内补体mRNA的动态可能与病毒增殖、细胞抗病毒反应Mavs的变化无关。

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0引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2.方法：

2 结果

2.1 DENV-2的增殖、鉴定及效价滴定

2.2 Real-time PCR检测各目的基因特异性引物的标准曲线及熔解曲线

2.3 ANA-1细胞的极化

2.4 DENV-2感染M0/M2极化的 ANA-1细胞

3 讨论

3.1 不同极化巨噬细胞表达补体基因的动态

3.2 DENV-2感染与补体、巨噬细胞极化间相互作用的探讨

4 结 论

参考文献

综述：补体在免疫应答中作用的研究进展

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