MAPK1、MAP2K4基因多态性与缺血性脑卒中及其中医证型遗传关联研究

摘要

目的：MAPK级联反应是参与中风发生发展病程的重要通路，丝裂原活蛋白激酶1(MAPK1)与丝裂原活蛋白激酶激酶4(MAP2K4)是MAPK级联反应的重要因素。本研究旨在探讨MAPK1基因rs6928、rs9340多态性及MAP2K4基因rs3826392多态性与缺血性脑卒中（ischemic stroke, IS）及其中医证型、数量性状、基因表达的相关性。　　方法：共纳入IS病例816例（男性465例，女性351例），和与之性别、年龄相匹配的对照816例（男性433例，女性383例）。采用北京天根科技有限公司（Tiangen Biotech， Beijing， China）的血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA，运用Sequenom MassARRAY技术对MAPK1基因rs6928、rs9340多态性及MAP2K4基因rs3826392多态性进行基因分型检测。采用HITACHI日立7600全自动生化分析仪检测IS患者总胆固醇（totalcholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low densitylipoprotein cholesterin，LDL-C）。使用 SPSS16.0 for windows软件， PLINK软件（http://pngu.mgh.harvard.edu/~purcell/plink/）进行相关统计分析；运用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测外周血mRNA表达水平。　　结果：　　1.哈温平衡（Hardy-Weinberg Equilibrium，HWE）检验：MAPK1基因rs6928、rs9340多态性及MAP2K4基因rs3826392多态性在对照组中的基因型分布均符合HWE平衡定律（均为P>0.050）。　　2. MAPK1、MAP2K4基因多态性与IS遗传易感性的关联分析：　　①MAPK1基因rs6928、rs9340多态性及MAP2K4基因rs3826392多态性与IS遗传易感性的关联均无统计学意义（均为P>0.050）；　　②在性别分层分析中，rs6928、rs9340及rs3826392基因多态性与IS遗传易感性的关联亦无统计学意义（均为P>0.050）　　3. MAPK1、 MAP2K4基因多态性与IS相关中医证型遗传易感性的关联分析：　　①风痰瘀阻证：未发现rs6928、rs9340及rs3826392基因多态性与IS遗传易感性的关联有统计学意义（均为P>0.050）；进一步性别分层分析，在男性中，rs9340多态性与IS风痰瘀阻证易感性具有统计学意义（隐性模型P=0.047，Padj=0.043）。　　②气虚血瘀证:rs6928、rs9340及rs3826392基因多态性与IS遗传易感性的关联亦无统计学意义（均P>0.050）；性别分层后分析，上述基因多态性与IS气虚血瘀证易感性亦不存在统计学相关性（P>0.050）。　　4. MAPK1、 MAP2K4基因多态性与IS患者相关数量性状的关联分析：　　Rs6928、rs9340及rs3826392基因多态性与IS相关数量性状（TC、TG、HDL-C、LDL-C）不存在统计学关联（P>0.050）；进一步性别分层分析后，rs6928基因多态性与男性IS患者的TG水平显著相关（加性模型：Padj=0.035）；在女性IS患者中，未发现rs6928、rs9340, rs3826392基因多态性与上述相关数量性状在各模型中存在统计学关联（P>0.050）。　　5. MAPK1、 MAP2K4基因多态性与IS不同中医证候患者相关数量性状的关联分析　　①风痰瘀阻证：rs6928、rs9340及rs3826392基因多态性与IS风痰瘀阻证患者的TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平均不具有显著相关性（P>0.050）；　　②气虚血瘀证：rs6928多态性与IS气虚血瘀证患者的TG水平显著相关（加性模型:Padj=0.048;显性模型:Padj=0.008），rs9340多态性与IS气虚血瘀证患者的TG水平间的关联具有统计学意义（显性模型:Padj=0.041）；而rs3826392多态性与IS相关数量性状间的关联均无统计学意义（P>0.050）。进一步性别分层分析，在IS男性患者中，rs6928多态性与TG水平存在统计学关联（加性模型:Padj=0.010;显性模型:Padj=0.004）；在IS女性患者中，rs9340多态性与HDL-C水平间具有统计学意义（显性模型: Padj=0.046）；rs3826392多态性与IS气虚血瘀证患者的相关数量性状水平在各模型中均不存在统计学关联（P>0.050）　　6. MAPK1、MAP2K4基因表达水平与IS的关系　　与正常对照相比， MAPK1基因mRNA的表达水平显著下调（P<0.050），而MAP2K4基因相对表达量与对照组间差异无统计学意义（P>0.050）。　　7. MAPK1、MAP2K4基因表达水平与IS不同中医证型的关系：　　与正常对照相比，MAPK1、MAP2K4基因mRNA在风痰瘀阻证及气虚血瘀证中的相对表达量与对照组间差异无统计学意义（P>0.050）。　　8. MAPK1、MAP2K4基因mRNA表达水平分别在风痰瘀阻，气虚血瘀证型中的关联分析：　　风痰瘀阻证患者MAPK1、MAP2K4基因相对表达量与IS气虚血瘀证患者间差异具有统计学意义（P<0.050）；携带 rs6928 CC基因型的风痰瘀阻证患者的MAPK1 mRNA表达水平显著低于其他基因型携带者(P=0.006)。　　结论：MAPK1基因rs6928、rs9340多态性及MAP2K4基因rs3826392多态性与IS发病及其风痰瘀阻证和气虚血瘀证未存在明确关联。然而，rs9340多态性影响中国广西汉族男性IS风痰瘀阻证的发生；MAPK1基因多态性可能参与影响IS气虚血瘀证的脂质代谢。MAPK1基因表达可能影响IS的发生发展。

目录

声明

引言

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

1.2实验材料

1.3 研究方法

1.4 质量控制

1.5 统计分析

2 结果

2.1 研究对象的基本特征

2.2 Hardy-Weinberg Equilibrium（ HWE）检验

2.3单位点关联分析

2.4相关数量性状关联分析

3 MAPK1、MAP2K4基因表达水平

3.1 MAPK1、MAP2K4基因表达水平与IS的关系

3.2 携带不同基因型的MAPK1、MAP2K4基因多态性表达水平与IS的关系

3.3 MAPK1、MAP2K4基因表达水平与IS不同中医证型的关系

3.4 携带不同基因型的MAPK1、MAP2K4基因多态性表达水平与IS中医证型的关系

3.5 MAPK1, MAP2K4 基因mRNA表达水平分别在风痰瘀阻，气虚血瘀证型中的关联分析

4 讨论

4.1 MAPK1、MAP2K4基因多态性与IS易感性的关联分析

4.2 MAPK1、MAP2K4基因多态性与IS中医证型的相关性

4.3 MAPK1、MAP2K4基因多态性与IS血脂水平的相关性

4.4 MAPK1、MAP2K4基因多态性与IS中医证型血脂水平的相关性

4.5 MAPK1、MAP2K4基因表达与IS及其中医证型的关系

4.6 存在的问题和展望

结论

参考文献

附录

缩略词表

综述:MAPK1、MAP2K4基因与缺血性脑卒中的研究概况

致谢

个人简介及攻读学位期间获得的科研成果